RNS IN XENOPUSLARVEN 



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und anschliessend wieder zweimal mit Phenol-Kresol-Mischung und 0,5 m NaCI 

 extrahiert. Die nochmals ausgefâllte RNS ( — 20°C, 4 — 6 h) wurde in 1 ml Lôsung 

 II aufgenommen und 2 h gegen dieselbe Losung dialysiert. Die gereinigte RNS 

 wurde schliesslich ausgefàllt und bis zur Weiterverarbeitung bei — 20 C C auf- 

 bewahrt. 



2.3. Auftrennung der RNS im Polyacrylamidgel. 



Die RNS wurde nach den Angaben von Weideli und Mitarb. (1969) im 

 Polyacrylamidgel aufgetrennt. Es handelt sich dabei um das schon von 

 Grossbach und Weinstein (1968) beschriebene Gel, das aus zwei Schichten mit 

 unterschiedlicher Acrylamidkonzentration (2,6 und 7% je 3 cm) aufgebaut ist. 

 Das Acrylamid (purum, Fluka, Buchs, Schweiz) und das N,N\ Methylen-bis- 

 acrylamid (pract., Fluka) wurde vor Gebrauch nach der Anleitung von 

 Loening (1967) umkristallisiert. Im Verlaufe unserer Untersuchungen wurden 

 anstelle von Glasrôhrchen (Durchmesser 3 mm bzw. 5 mm) Rohrchen aus Plexi- 

 glas verwendet, so dass ein Verstàrken des 2,6%igen Gels mit 0,5% Agarose 

 (Behringwerke, Marburg Lahn, Deutschland) nicht mehr notwendig war. Der 

 Verzicht auf die Agaroseverstârkung hatte den Vorteil, dass das friiher stets 

 beobachtete Liegenbleiben eines erheblichen Anteils der RNS am Start (Abb. 3) 

 vermieden werden konnte. Die Gele wurden in 15%iger Essigsàure und 1% 

 Lanthan-acetat fixiert und mit Gallocyanin-Chromalaun gefàrbt. 



2.4. Messung der Radioaktivitât. 



Die Radioaktivitât des 32 P wurde in einem Flussigkeits-Scintillationszahler 

 (LS 233 Beckman) in 10 ml Scintillatorlosung (900 ml Toluol; 180 ml Metanol; 

 3,6 g PPO, 2,5-Diphenyloxazole, Beckman Instruments International, Genf, 

 Schweiz) gemessen. Um die Verteilung von 32 P0 4 in die verschiedenen RNS- 

 Fraktionen zu bestimmen, wurden die gefârbten Gele mit Trockeneis eingefroren, 

 zwischen zwei Kâmmen in gleiche Stlicke zerschnitten und direkt in 10 ml Scintil- 

 lator bei einer Zâhlausbeute von mindestens 85 % gemessen. 



2.5. Zonenzentrifugafion der RNS. 



Die linearen Saccharosegradienten wurden mit einem „Density Gradient 

 Former" (Beckman) hergestellt. Die RNS-Lôsung wurde in einem 17 ml 5 — 20% 

 igen Saccharosegradienten (0,1 m Na-acetat pH5; 0,05 m NaCI) im SW 27 Rotor 

 einer „Spinco Ultrazentrifuge" 18 h bei 4°C und 25 000 rpm zentrifugiert. Die 

 Gradienten wurden mit einem „Buchler Densiflow" (Buchler Instruments, New 

 Jersey, USA) in 0,4 ml Fraktionen zerlegt und deren Extinktion bei 260 nm 

 gemessen. Vor der elektrophoretischen Auftrennung wurden die im Dichte- 

 gradienten erhaltenen Fraktionen mit 2,5 Volumenteilen Alkohol ausgefàllt. 



