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somen und zwei Fraktionen der pH 5,3-Enzyme des gewunschten Stadiums 

 wurden nach folgendem Verfahren gevvonnen: 



Médium A: 0,05 m TR1S-HC1 pH 7,8, 0,025 m KC1, 0.011 m MgCl 2 , 0,01 m 

 NH 4 C1, 0,004 m 2— Mercaptoàthanol, 0,25 m Saccharose, 0,0001 m 

 EDTA, abgeàndert nach Hoagland (1955). 



Médium B: 0,9 m Saccharose, 0,003 m MgCl 2 , 0,025 m KC1, 0,0001 m EDTA, 

 nach Jenny et al. (1962). 



Médium C: 0,15 m TR1S-HC1 pH 8,4, 0,01 m PTC. 



Fur die Herstellung der tRNS und mRNS wurden 4-tàgige — / — -Larven 

 bzw. 5-tagige /f3J/r-Larven mit Phénol extrahiert. Nach Dialyse wurde der 

 DNS-freie RNS-Extrakt Uber einen Dichtegradienten (5 — 20% Saccharose) 

 geschichtet und zentrifugiert. tRNS wurde aus dem niedermolekularen Bereich 

 gesammelt, wâhrend mRNS dem Bereich 7 — 25 S entnommen werden konnte. 

 Vorversuche zeigten, dass vorwiegend RNS aus diesem Bereich die Inkorporation 

 der Aminosàuren in die Protéine stimuliert. Schliesslich wurden die optimalen 

 Konzentrationen der einzelnen Komponenten mit Hilfe eines synthetischen 

 Messengers (Poly-UAG, 4:2:1) festgelegt. Das von uns verwendete zellfreie 

 System hat die folgende Zusammensetzung: 



1 ml Médium A enthàlt: 4 mg Ribosomen, 6 mg pH- 5,3-Enzyme, 0,5 mg pH 

 5,3 — iiberstehende Enzyme, 2 mM ATP, 0,25 mM GTP, 10 mM Creatinphosphat, 

 100 [jig Creatinphosphokinase, 0,005 mM PTC, 250 jxg tRNS, 2,5 mg „mRNS",i 

 3,2 ijlC 14 C-Leu (312 mC/mM), 0,81 utC 14 C-Val (108 mC/mM) und 0,005 mM je 

 Aminosàure (L-Ala, L-Arg, L-AspN, L-Cys, Gly, L-Glu, L-GluN, L-Met, 

 L-Tyr, L-Phe, L-His, L-Ileu, DL-Thr, L-ProOH, L-Pro, L-Try, L-Lys). 



Das Gemisch wurde zuerst ohne Zugabe der Enzymfraktion bei 20 C 

 wàhrend 10 min vorinkubiert, um die Polysomenbildung zu ermoglichen. An-| 

 schliessend wurde die Enzymfraktion zugegeben, und das vollstàndige System 

 bei 37 C wâhrend 60 min gehalten. Nach Beendigung der Inkubation wurden 

 die Protéine mit 4 Volumen einer gesàttigten (NH 4 ) 2 S0 4 -Lôsung ausgefâllt, 

 abzentrifugiert, in Médium C aufgenommen und gegen dasselbe Médium bei 

 6 C dialysiert. Die gereinigten Proben wurden mittels Polyacrylamidgel-Elektro- 

 phorese aufgetrennt. Nach densitometrischer Auswertung der Proteinkonzentra- 

 tion wurde die Aktivitàt der einzelnen Banden mit einem Fliissigkeits-Szintilla- 

 tionszàhler ermittelt. 



Ergebnisse und Diskussion 



Die Ergebnisse fur die +/ + - und 1(3 ;/r-Larven sind in Abbildung 1 

 dargestellt. Das elektrophoretische Muster zeigt, dass die fur die in vitro Synthèse 



