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LISELOTTE KAUFMANN 



Imaginalentwicklung zu verfolgen und zu untersuchen, ob sie môglicherweisU 

 parallel zur Entwicklung der Funktionsfàhigkeit der Muskelfasern verlaufen. [ 

 Im folgenden wurde eine Bestimmungsmethode fur Na + -, K + -, Ca 2+ i 

 und Mg 2+ - Ionen in der Haemolymphe entwickelt. Fur die Versuche wurde» ! 

 Puppen im Diapausestadium und Tiere vom 18. und 21. Tag nach Entwickll 

 lungsbeginn verwendet. 



2. EXPERIMENTELLER TEIL 



a ) Gewinnung der Haemolymphe 



Zur Blutgewinnung wurde bei den Diapausétieren die Cuticula am Abdomei]j 

 sorgfâltig aufgeschnitten. Bei geringem Druck auf den Thorax fliesst Haemo II 

 lymphe tropfenweise aus der Schnittstelle aus, ohne Fettzellen mitzuschwemmenl 

 Sie wurden in tarierten Zentrifugenglàsern gesammelt und dann gewogen. Da di<j| 

 Bestimmung des spezifischen Gewichtes der Haemolmyphe den Wert voij 

 1,0 g/cm 3 ergeben hatte, entspricht ein Gramm einem Milliliter. Durch Wàgei 

 lâsst sich die Blutmenge genauer bestimmen als durch Pipettieren; zudem kani 

 so die ganze Probe fur die Bestimmung der Ionen verwendet werden. Norma: 

 lerweise wurden pro Puppe 1 — 2 ml Haemolymphe erhalten. 



Fur die Tiere vom 18. und 21. Tag nach Entwicklungsbeginn war die obéi 

 beschriebene Méthode der Blutgewinnung ungeeignet. Als besser erwies es sichi 

 wenn der Thorax lângshalbiert wurde. Durch die Tàtigkeit des Herzschlauch:. 

 gelangt stândig neues Blut in den Thorax, von wo es fortlaufend abgesaug 

 werden konnte. Pro Tier wurden so 0.5 — 1.0 ml Haemolymphe erhalten. Difi 

 Haemolymphe von Imagines wurde nicht untersucht, da es nicht môglich warj 

 genùgend grosse Blutproben zu gewinnen. 



b) Auf arbeitung der Haemolymphe 



Fur eine Blutuntersuchung wurden jeweils 0.5 — 1.0 ml Haemolymphe 

 verwendet. Dièse wurden zur Ausfàllung der Protéine mit 4 ml 10% Trichlores- 

 sigsàure versetzt und danach der Niederschlag durch Zentrifugation abgetrennt 

 Die ùberstehende Lôsung wurde dekantiert, 3 ml davon mit 3 ml H 2 1 verdùnnl 

 und auf ein mit Ionenaustauscher Amberlite IRA 410 2 gefiilltes Chromato- 



1 Fur sàmtliche Versuche wurde bidestilliertes Wasser verwendet. 



2 Der Ionenaustauscher musste vor Gebrauch gereinigt und von der Chlorid- in die Acetat- 

 form ùbergefuhrt werden. Er wurde der Reihe nach mit folgenden Lôsungsmitteln aufgeschlàmml 

 und anschliessend filtriert: Methanol; Methanol-Wasser-(l :1); Wasser; zwei mal 2 NNa 2 C0 3 : 

 zwei mal Methanol ; zwei mal Wasser. Dann wurde der gereinigte Ionenaustauscher in ein Chroma- 

 tographierohr eingefullt und Solange mit 2N Essigsàure eluiert, bis sich im Eluat mit Silbernitrat 

 keine Chlorid-Ionen mehr nachweisen liessen. Der nun in der Acetatform vorliegende Ionenaus- 

 tauscher wurde noch mit destilliertem Wasser neutral gewaschen. Die Kapazitàt betràgt ca. 

 1 mAequivalent pro Gramm feuchtes Harz. 



