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H. WEIDELI, E. KUBLI UND P. S. CHEN 



30,000 Upm (Spinco Modell L 50, Rotor SW 50). Das Zentrifugenrôhrchen wurde 

 am Boden angestochen, und Fraktionen von je 3 Tropfen gesammelt. Den ein- 

 zelnen Fraktionen wurde jeweils 100 [il entnommen, mit 100 yA 0,01 m NaAc 

 verdiïnnt und die Absorption bei 260 nm in einem Beckman DU Spektralphoto- 

 meter gemessen. 



5. Polyacrylamidgel-Elektrophorese und densitometrische Auswertung 



Die elektrophoretische Auftrennung der RNS wurde hauptsàchlich nach 

 der Méthode von Grossbach und Weinstein (1968) vorgenommen. Es wurden 

 folgende Losungen fur die Herstellung des Gels verwendet: 



a) Acrylamid 15 g b) HC1 1 n 48 ml 



Bisacrylamid 0,75 g TRIS 6,85 g 



Wasser ad 100 ml TEMED 0,46 ml 



a') Acrylamid 15 g Wasser ad 100 ml 



Bisacrylamid 0,40 g c) N, N, N', N'-Tetramethylendiamin 



Wasser ad 100 ml d) Ammoniumpersulfatlôsung 10% 



Das 2,6%ige Gel bestand aus 4,33 ml a', 8,33 ml b, 0,02 ml c, 0,02 ml d und 

 12,12 ml Wasser, und das 7%ige Gel aus 11,66 ml a, 8.33 ml b, 0,02 ml c, 0,02 ml d 

 und 4,79 ml Wasser. Das 7%ige Gel wurde in Glasrôhrchen von 7,5 cm Lange 

 und 0,5 cm Innendurchmesser eingefùllt (3 cm hoch) und anschliessend mit 

 2,6%igem Gel (bis 6,5 cm) ùberschichtet. Das 2,6%ige Gel wurde dann sorg- 

 fàltig mit Wasser ùberschichtet und 30 min zur Polymérisation stehen gelassen. 

 Vor dem Auftragen der zu untersuchenden Probe fùhrten wir eine Vorelektro- 

 phorese bei 4° C wâhrend 30 min durch (1 mA/Tubus, Elektrodenpuffer : 5,52 g 

 Diaethylbarbitursàure, 1,0 g TRIS, ad 1000 ml Wasser, pH 7,0). Die RNS-Probe 

 wurde in gleichen Mengen Puffer I (0,01 m NaAc pH 5,1, 10" 4 mMgCl 2 ,20% 

 Saccharose) und Puffer II (48 ml 1 n HC1, 4,95 g TRIS, 0,46 ml TEMED, ad 

 50 ml Wasser, pH 5,5) aufgenommen und unter den Elektrodenpuffer dem Gel 

 ùberschichtet. Die Elektrophorese fand zunâchst bei 4° C, 60 min, 1 mA/Tubus 

 statt, und dann 1 10 min lang, 3 mA/Tubus. Die Gelstreifen wurden durch Wasser- 

 druck mit einer Injektionsspritze aus den Glasrôhrchen gelôst und nach den An- 

 gaben von Grossbach und Weinstein (1968) mit Gallocyanin gefàrbt. Die densito- 

 metrische Auswertung erfolgte mit einem Densitometer (DD 2) und einem 

 Schreiber (BD 5) der Firma Kipp und Zonen. 



6. Messung der Radioaktiviîât 



a) Nach Dichtegradienten-Zentrifugation: Nach der Messung der Absorp- 

 tion wurde zu den 200 fjd RNS 100 fig Trâger-RNS zugegeben und mit TCA 



