868 



FRANZISKA BRIEGEL-HANIMANN 



den Mànnchen eine solche von 50 I. E. in Holtfreterlosung intraperitoneal injiziert. 

 Die Eiablage begann etwa 3 Tage spâter. 



Die Enthullung der Froscheier geschah nach einer chemischen Méthode 

 (Spiegel, 1951). Die âussere Gallerthiille lâsst sich durch i^-l-stùndige Behandlung 

 mit einer 2 %igen, durch Cystein aktivierten Papainlôsung (Merck, Verdauungs- 

 kraft 1:350) bei pH 6,6-6,8 entfernen; die innere Gallerthiille lôst sich durch 

 i/2-stundige Behandlung mit einer 2,5%igen Lôsung von Na-thioglykolat bei 

 pH 8,1 auf. Stetiges Rùhren oder Schùtteln beschleunigt diesen Vorgang, da die 

 angedaute Gallerte leicht reisst und die Embryonen somit herausfallen. Nach 

 griindlichem Waschen mit Brunnenwasser wurde ein Teil der Embryonen direkt 

 fur die Bestimmung des Trockengewichtes, des Stickstoffgehaltes und der Gesamt- 

 menge Ninhydrin-positiver Stoffe verwendet, der andere, grôssere Teil lyophilisiert 

 und anschliessend bei — 27° C aufbewahrt. Bei den ùbrigen Amphibienarten 

 wurde die Entfernung der Gallerthiille allein durch eine 10-minùtige Behandlung 

 mit Na-thioglykolat erreicht. 



Das Trockengewicht wurde von einzelnen Embryonen bestimmt, nachdem 

 sie wâhrend 12 Stunden bei 110° C in Nâpfchen aus Aluminiumfolie getrocknet 

 worden waren. Die Mittelwerte der untersuchten Entwicklungsstadien setzen sich 

 aus Messungen an verschiedenen Laichballen zusammen. 



Die Bestimmung des Stickstoffgehaltes einzelner Embryonen wurde nach 

 der Ultramicro-Kjeldahl Technik von Boell und Shen (1954) durchgefûhrt. 

 Vorangehend wurde bei diesen Embryonen das Frischgewicht bestimmt. 



Fur die Messung des Totalgehaltes an Ninhydrin-positiven Komponenten 

 wurden einzelne Embryonen mit 200 \jA 100% igem Methanol homogenisiert und 

 anschliessend mit 100 \û eines Methanol-Wasser-Gemisches (1:1) extrahiert. 

 Dièse Proben wurden eindimensional papierchromatographisch in 70% igem 

 n-Propanol aufgetrennt. Nach Entwicklung mit Ninhydrin wurde die Extinktion 

 des Cu-Komplexes in einem Spektrophotometer (Beckman DU) bei 510 nm 

 abgelesen (Chen und Diem, 1961). 



Die fur die Fraktionierung der Aminosàuren und Derivate verwendeten 

 Proben wurden aus lyophilisiertem Material nach den Angaben von Mitchell 

 und Simmons (1962) sowie Chen und Hanimann (1965) hergestellt. Schon Barth 

 und Barth (1951) stellten bei Rana pipiens fest, dass die Extrakte aus Embryonen 

 viel Dotter und in spatern Stadien ein weisses fibroses Material enthalten, welches 

 bei geringen Tourenzahlen sehr schwer sedimentiert. Die R. temporaria-Embryonen 

 haben dieselben Eigenschaften. Deshalb wurde der Extrakt mit Chloroform im 

 Verhâltnis 1:1 10 Minuten lang intensiv geschiittelt und dann 1-2 Stunden bei 

 ca. 5500 /g zentrifugiert. Die iïbcrstehende Losung wurde in einem Yakuum- 

 Rotationsverdampfer bei 30 C eingedampft und dann in H 2 bidest. auf- 

 genommen. Falls clic Losung immer noch eine Trùbung zeigte, wurde die Chloro- 

 formbehandlung wiederholt. Vor der Analyse wurden die einzelnen Proben mit 



