IONENAUSTAUSCH-CHROMATOGRAPHISCHE UNTERSUCHUNGEN 



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Na-citrat-Puffer (pH 2,2) im Verhàltnis 1:1 verdùnnt. Die benôtigte Substanz- 

 menge betrug zuerst 0,5-1,5 gr Trockengewicht/Analyse und spâter, nachdem die 

 Messempfindlichkeit des Apparates auf das 3-fache erhôht worden war, 0,3-0,6 gr 

 Trockengewicht, was 300-1000 Eiern resp. 200-400 Eiern entspricht. 



Eine gute Auftrennung der verschiedenen Ninhydrin-positiven Komponenten 

 wurde mit dem ionenaustausch-chromatographischen Verfahren nach Spackman, 

 Stein und Moore (1958) erzielt. Dazu stand ein automatischer Aminosâuren- 

 Analysator (Beckman 120 B) zur Verfùgung. Der Vergleich mit Standard- 

 chromatogrammen ermôglichte die Identifikation der Aminosâuren im Extrakt. 

 Saure Hydrolyse des Extraktes mit 6N HC1 (15 Stunden, 120° C) vor der chroma- 

 tographischen Analyse gab Aufschluss ùber die Verteilung von Peptiden und 

 anderen hydrolysierbaren Stoffen. 



Fur die quantitative Auswertung wurden Bezugskonstanten aus Eichchro- 

 matogrammen bekannter Aminosâuren und Derivate ermittelt. Fur Glycero- 

 phosphoàthanolamin, Peptide und andere, unbekannte Komponenten diente der 

 Mittelwert aus allen Konstanten. 



Zur Identifizierung unbekannter Fraktionen wurde das Eluat nach dem 

 Verlassen der Saule iiber das Stream-Divider-System geleitet und in einem auto- 

 matischen Fraktionskollektor gesammelt (Chen und Hanimann, 1965). Die zur 

 weiteren Untersuchung bestimmten Fraktionen wurden dann an einer Dowex- 

 2 Saule (0,9 x 10 cm) entsalzt (Drèze, Moore und Bigwood, 1954). Anschliessend 

 wurden die so gereinigten Proben und deren Hydrolysate mit Hilfe von ein- und 

 zweidimensionaler Papierchromatographie und Hochspannungselektrophorese 

 (Chen et al, 1968) analysiert. Eine weitere Information ergab sich mit der fur 

 Peptide spezifischen Nachweismethode von Rydon und Smith (1952) und Pan 

 und Dutcher (1956). 



Aile Aminosâuren und Derivate in den Abbildungen und Tabellen sind mit 

 ihren ersten drei Buchstaben abgekurzt angegeben mit Ausnahme der folgenden: 

 a-AAA = a-Aminoadipinsâure ; oc- und y-ABA = a- und y-Aminobuttersâure; 

 (3-AIBA = p-Aminoisobuttersâure; CYST = Cystathionin; EA = Aethanolamin; 

 GPEA = Glycerophosphoàthanolamin; GSH = reduziertes Glutathion; GSSG 

 = oxydiertes Glutathion ; LA = Lâvulinsâure ; PEA = Phosphoâthanolamin. 



C. ERGEBNISSE 



1. Entwicklungsdauer 



Da liber die Entwicklungsdauer von Rana temporaria bei 13° C keine Litera- 

 turangaben bestehen, musste dièse zuerst bestimmt werden. Fur die verschiedenen 

 Entwicklungsphasen wurde die Stadieneinteilung an R. pipiens und R. sylvatica 



