POLYMORPHISME CHROMOSOMIQUE (LEGGADAS) 



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DEUXIÈME PARTIE 



Analyse autoradiographique 



1. MATÉRIEL ET TECHNIQUE 



Animaux utilisés: M. setulosiis, un q et une Ç; M.minutoides/musculoides, 

 un 3 et une 2. 



Technique: des fragments prélevés dans la partie antérieure de la cage thoraci- 

 que sont à Torigine des cultures de fibroblastes établies selon la méthode de Hsu et 

 Kellogg (1960). Lorsque les cultures secondaires sont suffisamment riches, elles 

 sont trypsinisées (0,1 ml trypsine à 0,2 % par ml du mileu de culture. Basai Médium 

 Eagle) puis les cellules sont introduites dans un tube de Leighton contenant un 

 porte-objet; sur celui-ci, elles s'étalent et prolifèrent. On ajoute la thymidine 

 tritiée à raison de 7,5 ixC/tube (H^TdR, activité spécifique 1,9 C/mM, Schwarz) 

 puis, après une à deux heures, la Colcémide (0,1 {ig/ml de milieu de culture). Trois 

 heures plus tard le traitement hypotonique (NaCl, 0,17%) est prolongé durant 

 20 minutes. Le mélange méthanol/acide acétique 3/1 sert à la fixation. Les pré- 

 parations séchées à l'air sont colorées à l'acéto-orcéine, déhydratées et montées 

 à TEuparal. 



Il m'a été possible de localiser environ 80 cinèses par couvre-objet chez 

 M. setulosus alors que chez M. minutoidesimusculoides le chiffre de 30 n'est guère 

 dépassé. 



Les lamelles protectrices sont décollées à l'alcool absolu, les couvre-objets 

 sont séchés et recouverts d'un stripping-film Kodak AR-10; les préparations 

 demeurent pendant quatorze jours dans l'obscurité et à basse température. 



Ce délai expiré, le film autoradiographique est développé par le révélateur 

 Kodak D19b à 14° pendant 4 minutes; les préparations, colorées par une solution 

 tamponnée de Giemsa sont montées à l'Euparal. 



Les métaphases sont photographiées à un grossissement de 400 X avant et 

 après la mise en place du film autoradiographique. 



