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NOËL BERNARD 



là d'un cas particulièrement simple, puisque je disposais de plantules 

 prises dans des tubes de culture où elles ne pouvaient être souillées 

 ni de bactéries ni de Mucédinées banales. Je m'occupe en premier lieu 

 de ce cas. 



Voyons d'abord quel est l'outillage nécessaire. Je me suis servi d'un 

 petit microscope redresseur, donnant un grossissement de 80 diamètres, 

 avec une distance frontale assez grande pour permettre aisément sous 

 l'objectif toutes les manœuvres utiles. La plantule à examiner était 

 placée, au sortir du tube de culture, sur une lame de verre qu'on avait 

 au préalable mouillée d'alcool et flambée. J'avais toujours à portée de 

 la main des tubes stérilisés d'avance où je pouvais prendre aseptiquement 

 une goutte de décoction de salep pour humecter au besoin la plantule. 

 Les dissections étaient faites avec de fines aiguilles flambées chaque fois 

 qu'il était utile. Enfin, pour prendre les très petits objets, je me servais 

 d'un fil de platine très fin (fil à la Wollaston), soudé au bout d'une 

 baguette de verre et recourbé à son extrémité libre en un anneau 

 minuscule. 



Une plantule étant déposée dans une goutte de décoction stérile, 

 on commence par la débarrasser du tégument de la graine, et, autant 

 que possible, du mycélium superficiel. On la transporte ensuite dans 

 une nouvelle goutte de décoction stérile où on la dilacère avec deux 

 aiguilles. Les pelotons mycéliens d'un certain nombre de cellules 

 sortent et nagent dans le liquide; on cherche les meilleurs, qui ne 

 doivent présenter aucune trace de dégénérescence ; cette recherche 

 nécessite parfois l'examen de la préparation à un plus fort grossisse- 

 ment. Quand quelques pelotons convenables sont distingués, on les 

 pousse avec une aiguille vers un côté de la goutte de liquide qui s'étale 

 un peu par ce mouvement. Ayant ainsi dans le champ du microscope 

 les pelotons qui doivent servir au semis, et rien d'autre, il reste à les 

 pêcher pour les semer un à un dans des tubes de culture. L'essentiel 

 pour cela est qu'il y ait assez et pas trop de liquide ; au besoin on en 

 ajoute, ou bien on le laisse pendant quelques instants s'évaporer. Le 

 point convenable étant atteint, on approche le petit anneau fait à 

 l'extrémité du fil de platine fin, de manière qu'un peloton et un seul 

 se voie juste en son centre. On baisse alors le fil, il se prend une gout- 

 telette de liquide dans l'anneau et le peloton avec elle ; la réussite 

 est presque sûre dès qu'on a acquis un peu d'habitude. Pour semer 

 le peloton il suffit de toucher le milieu de culture avec le petit anneau ; 

 on peut du reste, après cette opération, reporter l'anneau sous le mi- 

 croscope, afin de voir si le peloton n'y est plus. Toutes ces opérations 

 sont en réalité très rapides ; la méthode est des plus sûres ; elle ne 

 laisse pas en doute qu'on ait bien isolé du mycélium intracellulaire. 



Malheureusement, il arrive bien trois fois sur quatre que les pelotons, 

 même choisis avec tout le soin possible, ne germent pas. J'ai semé 

 en chambre humide, dans des gouttelettes de décoction de salep, des 



