LE NATURALISTE 



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COWENT ON ÉTUDIE LES iCROBES 



(Suite.) 



Milieux solides pour culture des microbes. 



Les cultures des microbes en milieux liquides con- 

 viennent surtout lorsqu'on veut avoir une récolte abon- 

 dante de bactéries ou pour l'étude de leurs fonctions. 

 Pour l'étude morphologique, on préfère les milieux 

 solides qui sont d'un emploi très commode et permet- 

 tent de noter diverses particularités de ces cultures, leur 

 couleur, leur forme, etc. 



Les milieux solides les plus employés sont les tran- 

 ches de végétaux massifs, tels que pommes de terre, 

 carottes, etc., de la gélatine et la gélose. 



Pour avoir des tubes de la première catégorie, on 

 découpe, dans des tranches de pommes de terre, des 

 cylindres ou des prismes d'environ 8 centimètres de 

 longueur et de 1 centimètre de section. On place 

 chacun d'eux dans un tube à essai ordinaire ou, mieux, 

 dans un tube légèrement étranglé à la paroi inférieure. 

 Dans l'ampoule du bas, on met un peu d'eau destinée 

 à entretenir humide l'atmosphère du tube et à empêcher 

 ainsi la pomme de terre de se dessécher. On bouche le 

 tube avec un épais tampon d'ouate, et, quand on en a 

 plusieurs, on les porte à l'autoclave, à la température de 

 115 degrés pendant un quart d'heure, pour les stériliser. 

 Au lieu de pommes de terre, on peut employer des 

 navets, des carottes, de la courge, de la betterave, des 

 fruits, des artichauts, etc. 



L'emploi de la gélatine, géiiéralisé par Koch, rend 

 aussi de très grands services : c'est ainsi que la pro- 

 priété qu'ont certaines bactéries de liquéfier la gélatine 

 est un caractère de premier ordre. La forme générale 

 des cultures sur gélatine est aussi presque caractéris- 

 tique pour chaque espèce. 



On emploie les meilleures gélatines du commerce, 

 on découpe les feuillets en petits morceaux et on les 

 fait fondre dans de l'eau, au bain-marie, jamais à feu 

 nu. En hiver, on prend la proportion de 6 à 10 grammes 

 de gélatine pour 100 grammes d'eau. En été, cette pro- 

 portion ne serait pas suffisante : la gélatine resterait 

 molle ; il faut alors de 13 à 20 grammes de gélatine pour 

 100 grammes d'eau. Quand la fusion est complète et 

 bien homogène, on rend la gélatine nutritive en ajou- 

 tant diverses substances nutritives, par exemple 1 à 

 2 ^ de peptone sèche, mais jamais de sucre ni de phos- 

 phate. Finalement on filtre la gélatine dans un enton- 

 noir chauffé. On coule la gelée dans des tubes à essai 

 que l'on ferme avec un tampon de ouate et on stérilise 

 à l'autoclave. A la sortie de celui-ci, on peut laisser les 

 tubes verticaux, de manière à avoir une surface libre 

 circulaire et de peu d'étendue. On peut aussi les incliner, 

 de manière que la gélatine, une fois refroidie, ait une 

 ,large surface libre. 



La gélatine présente l'inconvénient de fondre à la 

 température de 23 à 24 degrés. On ne peut donc y 

 cultiver les microbes qui demandent une température 

 plus élevée. D'autre part, elle se liquéfie souvent trop 

 facilement. Aussi, dans nombre de cas, la remplace-t-on 

 par la gélose, matière que l'on retire d'une algue marine, 

 des mers des Indes, le Gelidium spitiiforme; on la trouve 



dans le commerce sous la forme de longues lanières 

 plissées et translucides. 



On obtient de belles gelées nutritives avec la gélose, en 

 opérant de la façon suivante : 



« Vingt-cinq grammes du produit commercial, coupé 

 en petits morceaux sont mis à macérer dans un demi- 

 litre d'eau acidulé d'acide chlorhydrique à 6 ^; on laisse 

 en contact vingt-quatre heures en remuant à plusieurs 

 reprises. Après plusieurs lavages à grande eau pour 

 faire disparaître toute trace d'acide, on met l'algue déjà 

 gonflée dans 400 ou 500 grammes d'eau additionnée de 

 5 % d'ammoniaque ; on la retire après un jour et on la 

 lave comme précédemment. Pendant les fortes chaleurs 

 de l'été, il est bon de réduire de moitié le temps de ces 

 deux macérations successives. On fait alors bouillir à 

 feu nu un litre d'eau distillée, et, lorsqu'elle est en 

 pleine ébuUition, on y jette l'algue, qui se dissout 

 immédiatement ou en peu de temps. Le liquide est 

 essayé au papier de tournesol et neutralisé avec une 

 solution saturée de bicarbonate de soude. On filtre à 

 chaud, sur un entonnoir bain-marie ou de préférence 

 dans le stérilisateur à vapeur ou l'autoclave vers 

 100 degrés, après avoir placé sur une flanelle, ce qui 

 facilite beaucoup la filtration. Le liquide, très limpide, 

 se prend, par refroidissement en une belle gelée, opales- 

 cente lorsqu'elle est en masse, mais très transparente 

 en plaques ou dans les tubes à réactifs » (Macé). 



Ordinairement, avant de filtrer, on ajoute 1 à 2 gram- 

 mes de peptones sèches pour 100 grammes de gélose. 

 On peut aussi remplacer cette matière nutritive par 1 cà 

 2 % de glucose. 



En inclinant obliquement le tube avant que la gélose 

 soit prise en masse, on a, comme pour la gélatine, une 

 large surface libre, très favorable à la vitalité des colo- 

 nies microbiennes. 



Stérilisation des milieux de cultures 

 pour microbes. 



Que le milieu de culture soit liquide ou solide, on 

 l'enferme, finalement dans un vase en verre, ballon ou 

 tube, et on bouche le récipient avec un gros tampon de 

 ouate, pénétrant dans son orifice de plusieurs centi- 

 mètres et sortant en une assez forte touffe au. dehors. 



Avant d'y ensemencer des microbes, il faut, bien en- 

 tendu, stériliser le tout, récipient, contenu et bouchon. 



Le procédé le plus employé consiste à stériliser à 

 l'aide de la vapeur d'eau, sous pression, à l'aide de 

 Vautoclave Chamberland. C'est une vaste marmite de 

 papier, dont on ferme l'ouverture avec un couvercle 

 solidement boulonné. A l'intérieur, on place les tubes à 

 stériliser dans un papier métallique. Puis on chauffe à 

 TébuUition en laissant ouvert un tube de dégagement 

 pour permettre à l'air de partir. Quand tout l'appareil 

 est rempli de vapeur d'eau, ce dont on est prévenu par 

 la cessation du sifflement du tube de sortit, on ferme 

 celui-ci. Le manomètre ne tarde pas à monter et à indi- 

 quer, en même temps qu'une forte pression, une tempé- 

 rature plus élevée que 100 degrés. On règle le chauft'age 

 par le gaz, de manière que l'aiguille sort entre 115 degrés 

 à 120 degrés. Et on laisse dans cet état pendant un 

 quart d'heure environ. Les tubes que l'on en retire alors 

 sont stérilisés dans toute leur masse. 



A défaut d'autoclave, on peut se contenter de l'ébul- 

 lition dans de l'eau, mais le procédé est moins sùr parce 



