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LE NATURALISTE 



qu'il existe beaucoup de spores résistant a l'action de la 

 température de 100 degrés. 



Quand un liquide est altérable par les hautes tempé- 

 ratures, on peut néanmoins le stériliser, à l'aide de la 

 méthode par « chauftages répétés ». Elle repose sur ce 

 fait que les bactéries sont très sensibles à la chaleur, 

 puisque la très grande majorité meurent lorsqu'on les 

 soumet à une température de 60 à 65 degrés. Il suffit 

 donc de chauffer à cette température, pour tuer^ toutes 

 les bactéries d'un tube. Malheureusement, il reste les 

 spores qui résistent et ne tardent pas à donner des mi- 

 crobes. Mais il suffit d'attendre que ces spores soient 

 sorties de leur engourdissement : en les chauffant en ce 

 moment, on tue des nouvelles colonies. Ces chauffages 

 doivent être répétés à plusieurs reprises, car les spores 

 ne se développent pas toutes en même temps : dans 

 certaines espèces, elles donnent des microbes adultes 

 au bout d'un jour ou deux; dans d'autres, elles n'en 

 donnent qu'au bout de huit jours. 



La stérilisation par la chaleur est la seule que l'on 

 puisse employer pour les milieux solides. Pour les mi- 

 lieux liquides, il y a en outre une autre méthode : la 

 stérilisation par filtration. On se sert du filtre Chamber- 

 land qui se compose d'une enveloppe et à l'intérieur 

 d'une « bougie Chamberland », faite de porcelaine 

 dégourdie à 1200 degrés. Dans l'intervalle, on fait 

 arriver le liquide qui filtre avec une grande lenteur au 

 travers de la porcelaine et y abandonne ses microbes. 

 Bien entendu, il faut veiller à ce que le liquide soit 

 souillé à la sortie du filtre et tombe directement dans un 

 récipient stérilisé au préalable. 



Avec l'eau ordinaire, la bougie Chamberland marche 

 facilement, d'autant qu'elle y arrive avec une pression 

 assez forte. Avec d'autres liquides, la filtration ne pour- 

 rait s'opérer si l'on ne les y poussait avec une pression 

 très forte. On obtient celle-ci à l'aide d'une pompo fou- 

 lante, d'un genre spécial. 



Au bout de quelque temps, les bougies ont leurs pores 

 remplies de microbes, et ceux-ci finissent par passer 

 avec le liquide. Quand on juge ce moment arrivé, on 

 retire la bougie et on la fait bouillir longtemps dans de 

 l'eau acidulée pour détruire les matières organiques qui 

 l'imprègnent. A la longue, le filtre est à nouveau stéri- 

 lisée, mais sa porosité est un peu altérée. 



Ensemencement des cultures. 



Prenons un exemple simple. On a un tube contenant 

 une culture d'une seule espèce de bactérie sur pommes 

 de terre. Il s'agit d'ensemencer un tube analogue, mais 

 stérilisé. On se sert pour cela d'un petit instrument que 

 le microbiologiste ne quitte pour ainsi dire pas et qui, 

 dans une gravure allégorique, pourrait le caractériser, 

 comme la truelle caractérise le maçon : c'est simplement 

 un fil de platine emmanché dans une baguette de verre. 

 Le fil ne doit pas être trop rigide pour ne pas « déchi- 

 queter M les matériaux solides sur lesquels on vient à le 

 promener. On peut aussi le recourber en boucle à l'extré- 

 mité libre. 



On tient les deux tubes dans la main gauche et, pen- 

 dant les manipulations suiA'antes, il faut toujours les 

 incliner environ à 45 degrés. En effet, en les tenant 

 verticalement, au moment où on enlève les bouchons, 

 les germes de l'atmosphère auraient des chances de 

 tomber sur le milieu de culture et de l'infecter. Le tuhe 



étant incliné, les chances de contamination acciden- 

 telles sont moins grandes. 



De même que chaque fois que l'on va s'en servir, on 

 prend, à plusieurs reprises, l'aiguille de platine et le 

 tube de verre dans la flamme d'un bec Bunsen. L'aiguille 

 doit rougir; mais, avant de s'en servir, on attend quel- 

 ques secondes pour qu'elle ait le temps de se refroidir : 

 sans quoi les microbes qu'elle viendrait à toucher seraient 

 rôtis. 



Donc, l'aiguille étant stérilisée et tenue de la main 

 droite, on enlève, avec la même main, le tampon d'ouate 

 du tube peuplé de bactéries; on plonge dans celui-ci le 

 fil de platine jusqu'à ce qu'il vienne toucher la culture. 

 On retire le fil et on rebouche le tube. 



Puis, non moins rapidement, on enlève le bouchon du 

 tube stérile, on vient toucher les morceaux de pommes 

 de terre avec le fil et on referme : le tube est ensemencé, 

 bien qu'il paraisse identique à ce qu'il était avant. 



Pour plus de sûreté, avant de remettre les bouchons 

 d'ouate des tubes, on les passe quelquefois rapidement 

 dans la flamme pour détruire les germes de l'air qui, 

 pendant les manipulations, auraient pu s'accrocher à 

 l'huile. 



Avec les tubes de gélatine ou de gélose, l'ensemence- 

 ment se fait de la même façon. Quand ils ont été placés 

 verticalement au moment du refroidissement, on plonge 

 dans la masse, verticalement et à une certaine profon- 

 deur, le fil de platine portant des microbes, c'est ce 

 qu'on appelle l'inoculation on piqûre. Quand les tubes 

 ont été mis à figer, inclinés, on se contente de promener 

 l'aiguille sur la large surface libre en y traçant de petits 

 parallèles : c'est V inoculation ou strie. Dans chacun de 

 ces deux cas, la forme des cultures obtenues par la spore 

 n'est pas la même. 



Quand il s'agit d'ensemencer des milieux liquides, la 

 marche générale des opérations est la mémo. On prélèvo 

 une petite quantité du liquide contaminé avec l'aiguille 

 terminée en boucle à l'extrémité. Plus souvent on utilise 

 des tubes de verre effilés à la flamme et stérilisés : ces 

 pipettes prennent une plus grande quantité de liquide, 

 ce qui assure une contamination plus rapide. 



Les tubes, une fois ensemencés, doivent être placés, 

 autant que possible, dans une étuve à température cons- 

 tante. 



Isolement des microbes. 



Dans le paragraphe précédent, nous avons supposé 

 avoir une culture pure de microbes. Il nous faut savoir 

 maintenant comment celle-ci peut être obtenue. 



Les liquides ou solides contaminés contiennent, en 

 effet, presque toujours, une grande quantité d'espèces. 

 Le moyen le plus simple d'isoler ceux-ci est le procédé 

 de la dilution. Supposons que nous ayons un liquide 

 contaminé dont un centimètre cube renferme environ 

 1000 bactéries. Enlevons ici un centimètre cube et jetons 

 dans 100 centimètres cubes d'eau stérilisée au préalable 

 par la chaleur. Nous obtiendrons un nouveau liquide ne 

 contenant que 10 bactéries par 100 centimètres cubes. 

 Reste à isoler ces dernières. A cet effet, on ramollit un 

 peu la gélatine d'un tube stérilisé et on y fait tomber 

 un centimètre cube de ce dernier liquide, ce qui équi- 

 vaut à y mettre 10 bactéries. On tourne le tube plusieurs 

 fois sur lui-même de manière à bien mélanger le liquide 

 avec la gélatine. Lorsque ceci est atteint, on jette la 



