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2-3 parti di alcool a 95° che si getta dopo 24 ore di contatto; il residuo, ripreso in 

 boccia a tappo di gomma con 10 parti di alcool a 95°, lasciato a 37° per 8 giorni, agi- 

 tando alme. io una volta al di. Il soluto alcoolico, filtrato su carta Laurent o Schleiclier 

 e Schiill n. 590, si fa evaporare in capsula piana nel vuoto a 37°-40°. Il residuo, ripreso 

 con 3 parti di alcool a 99,3° (Schiapparelli-ridistillato), si filtra come sopra e si conserva 

 sotto C0 2 in bottiglie di vetro bleu o giallo a tappo a smeriglio, oppure nelle speciali 

 fialette descritte per l'antigeno neoplastico. 



Titolazione: in una serie di provette (accuratamente lavate con alcali, acidi, 

 acqua stili., alcool, etere e seccate alla stufa) si introduce con pipetta secca 1 cm 3 di 

 antigeno e si aggiungono rispett. 4-9-14-19-24 29 cm 3 di alcool a 99,3°. Ad 1 cm 3 di cia- 

 scuna di queste diluzioni alcooliche, posta in provetta secca, si aggiunge Va ccm - 4Ì 

 acqua stili, e dopo 10'-60' 7 ccm 3 di soluzione clorosodica al 10 °/, (Cloruro sodio secco 

 gr. 10 più acqua stili, sino a 100 era 3 ; filtrazione su carta spessa prima dell'uso); si 

 emulsiona capovolgendo tre volte. 



In una serie di provettine ben pulite e ben secche si pongono 0,1 cm 3 di siero nor- 

 male e rispett. in una altra serie di provettine 0,1 cm 3 . di siero di gravida. Ad una pro- 

 vetta per ciascuna serie si aggiunge 1 cm 3 di ciascuna delle emulsioni prima preparate. 

 Tutte le prove si lasciano per 24 ore a 37°. Dopo tale temDO si procede alla lettura. Si 

 avrà un precipitato in tutte e due le serie sino ad una certa diluzione di antigeno, al di 

 là della quale si osserverà precipitato solo nella serie con siero di gravida. Sarà questo 

 il limite minimo della diluzione. 



In una prova successiva si preciserà con più esattezza questo limite stabilendo delle 

 diluzioni intermedie di antigeno. Così se nella prima prova si è avuto precipitato in tutte 

 e due le serie con la diluzione Vs e precipitato solo col siero di gravida con la dilu- 

 zione Vk, si stabilirà una serie intermedia con diluzioni di antigeno Vs" 1 /'"/ 1 »* 1 /» scegliendo 

 fra queste diluzioni quella che dà più netto jprecipitato con siero di gravida, nessun pre- 

 cipitato con siero normale. 



Dopo queste prove preliminari, per maggior sicurezza, giova cimentare l'antigano 

 c m diversi sieri normali ed altri sieri di gravide "per assicurarsi dell'attività e del titolo. 



Le diluizioni alcooliche e le emulsioni delVantigeno non si possono conservare in 

 nessun, modo: volta per volta va preparata la diluzione di antigeno in alcool e l'emul- 

 sione. La soluzione madre invece si conserva purché si rinnovi il C0 3 ogni volta che 

 si apre la bottiglia contenente tale soluzione: quanto alle fiale, una volta aperte per 

 una esperienza il residuo non pud essere conservato. 



L'inosservanza di queste regole conduce al fallimento delle prove. 



Sieri in esame: il sangue deve essere prelevato con siringa secca direttamente da 

 uua vena, non con puntura di un dito, per evitare tracce di pigmenti ematici. Coagu- 

 lazione spontanea del siero a T. ambiente od in ghiacciaia: prelevamento del siero con 

 pipetta secca; centrifugazione prolungata con forte centrifuga elettrica. La pr>va va 

 eseguita infra le 12 ore successive al prelevamento del sangue, non più tardi. I sieri non 

 possono essere conservati in apparecchi congelatori, solo in ghiacciaia. 



Prova: S'introduce dapprima 0,1 cm. 3 del siero in esame, misurati con pipetta per- 

 fettamente pulita e secca (acqua stili., alcool, etere) in provettina di vetro sottile e per- 

 fettamente incolore (accuratamente lavata con alcali, acidi, acqua stili., alcool, etere e 

 seccata alla stufa ; indi si aggiunge 1 cm 3 . dell'emulsione di antigeno al titolo già de- 

 terminato di fresco preparata; si agita dolcemente la provettina per alcuni secondi senza 

 provocare la formazione di schiuma; si pone in termostato a 37° per 24-36 ore. 



