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meno  di  sensibilizzazione  batteriolitica,  allo  scopo  di  dare  una  più  larga 
base  sperimentale  alle  ipotesi  sulla  natura  di  queste  reazioni  immunitarie. 
A  tal  line  ho  studiato  come  varii  la  quantità  di  sensibilizzatrice,  che 
si  lega  ad  una  determinata  quantità  di  batteri,  col  variare  della  concentra- 
zione del  siero  batteriolitico  nel  liquido  ove  i  batteri  vengono  sospesi. 
Pertanto,  in  eguali  volumi  di  soluzione  fisiologica,  ove  erano  sospese 
quantità  costanti  di  batteri,  si  ponevano  volumi  differenti  di  siero  batterio- 
litico,  e  si  determinavano  poi,  nel  modo  che  sto  per  descrivere,  le  quantità 
di  sensibilizzatrice  che  si  legavano  ai  batteri. 
Ho  eseguito  due  gruppi  di  esperimenti,  adoperando  in  uno  un  siero 
antitifico,  e  nell'altro  un  siero  anticolerico. 
Metodo  e  tecnica  degli  esperimenti. 
1  sieri  batteriolitici  mi  vennero  forniti  dall'Istituto  sieroterapico  mila- 
nese. Come  antigeni  ho  usato  sospensioni  batteriche  in  soluzione  fisiologica 
(0,85  °/0  di  cloruro  di  sodio),  ottenute  da  culture  in  agar  di  ventiquattr'ore. 
Allo  scopo  di  uccidere  i  batteri  senza  ricorrere  a  quantità  tali  di  antisettici 
da  disturbare  le  reazioni  di  batteriolisi  e  di  emolisi,  le  sospensioni  batte- 
riche venivano  fatte  a  questo  modo.  In  un  centimetro  cubico  di  soluzione 
fenica  al  3  °/0  veniva  sospeso  il  materiale,  ricavato  da  una  cultura  in  agar. 
Dopo  circa  un'ora,  vi  si  aggiungevano  nove  centimetri  cubici  di  soluzione 
fisiologica;  e  quindi  il  liquido  veniva  filtrato  attraverso  carta,  per  allonta- 
nare i  piccoli  grumi  di  batteri,  che,  rendendo  meno  omogenea  la  sospensione, 
potevano  esser  causa  di  errore  nelle  prove  di  sensibilizzazione  e  di  dosaggio. 
Gli  esperimenti  vennero  condotti  nel  modo  seguente  :  si  cominciava  col 
determinare,  mediante  una  serie  graduale  di  prove,  qual  era  la  quantità  mi- 
nima di  siero  batteriolitico  che,  in  contatto  con  una  determinata  quantità 
di  antigeno,  faceva  deviare  completamente  una  data  quantità  di  complemento. 
Pertanto,  quantità  gradualmente  diverse  di  siero  erano  tenute  in  contatto, 
a  37°. 5  per  un'ora,  con  cm.3  0,1  della  suddetta  sospensione  batterica  e  con 
em.3  0,05  di  siero  fresco  di  cavia.  Il  volume  totale  del  liquido  era  di  quattro 
centimetri  cubici.  Contemporaneamente  una  certa  quantità  di  corpuscoli  rossi 
veniva  sensibilizzata  con  un  siero  emolitico  noto,  impiegando,  per  ogni  unità 
di  volume  di  essi,  due  unità  emolitiche  di  siero. 
Dopo  un'ora  di  permanenza  in  termostato,  si  aggiungeva,  in  ogni  prova 
di  batteriolisi,  un  cm.3  della  sospensione  di  corpuscoli  rossi  sensibilizzati;  e 
le  miscele  erano  tenute  in  termostato  per  due  ore. 
Dopo  questo  tempo,  si  giudicava  del  grado  d'emolisi  raggiunto  in  ogni 
tubo,  provando  la  trasparenza  del  liquido.  Si  notava  allora  qual  era  la  quan 
tità  minima  di  siero  batteriolitico  che  aveva  impedito  completamente  la  emo- 
lisi, e  si  segnava  anche  la  quantità  massima  che  non  l'aveva  affatto  ostacolata. 
