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C Colture in sabbia sterilizzata, previa sterilizzazione del seme, con 

 aggiunta di poltiglia di tubercoli o di acqua di lavaggio di terra di Sulla. 



16 novembre 1906. Seminagione e trattamento suddetto. 



15 dicembre 1906. Scalzando le piantine trovai nelle radici numerosis- 

 simi tubercoli in formazione. 



D. Colture acquose. Furono apprestate delle culture acquose non solo 

 per infettarle, quando le piantine si fossero sviluppate, con polpa di tubercoli, 

 ma anche con culture di bacteri che eventualmente avessi isolate dai tubercoli 

 stessi. Però, ad onta di ripetuti tentativi, non fu possibile far crescere la 

 Sulla in culture acquose, per le quali usai soluzioni nutritizie con le formule 

 più svariate, con e senza calce, eon e senza azoto ecc. 



Prove di isolamento del Bacterio. — Le prove di isolamento furono 

 iniziate nella primavera del 1906 con contenuto di tubercoli di piante semi- 

 nate nel 1905 all'Istituto Botanico con aggiunta di terreno di Sulla di pro- 

 venienza dai dintorni di Messina. Il materiale fu seminato su gelatina con 

 peptone e glucosio, su agar con peptone e glucosio, su gelatina con glucosio 

 e infuso di radici di Sulla : tutti substrati debolmente acidi. Con queste cul- 

 ture isolai quattro diversi bacteri la cui inoculazione su piantine di Sulla 

 non dette formazione di tubercoli. 



Credo utile di riassumere il procedimento tecnico da me seguito per l'isolamento 

 c per l'inoculazione dei bacteri. 



a) Isolamento. Scelte le piante più vigorose e lavate le radici in corrente d'acqua, 

 si sceglievano i tubercoli e si distaccavano insieme ad un certo tratto di radiee. Si sotto- 

 ponevano di nuovo a corrente d'acqua lavando la superficie con un pennello per allonta- 

 nare le particelle terrose, e dopo averli distesi su carta bibula, si distaccavano dalla 

 radice tagliandoli alla base. I turbercoli stessi venivano poi ripartiti in un certo numero 

 di provette ed ivi lavati con acqua sterilizzata, agitando per circa mezz'ora, e rinnovando 

 20-30 volte l'acqua. Dopo di che nelle provette stesse veniva versata rapidamente una solu- 

 zione di acido fenico al 5% agitando per 2-3 secondi, e poi sostituendo e rinnovando l'acqua 

 per 8-10 volte. Infine si versavano tutti i tubercoli rapidamente in una capsula di vetro 

 con coperchio, sterilizzata in stufa a secco, ed ivi ridotti a poltiglia con bacchetta di vetro 

 previamente arroventata: il liquido torbido serviva per l'inoculazione, Talvolta invece 

 di ridurre in poltiglia i tubercoli, si portavano in una capsula di vetro sterilizzata col 

 calore, ed ivi sezionati con un bisturi precedentemente arroventato; coll'ago di platino 

 si asportava dal centro del tubercolo una certa quantità di materiale che si portava in 

 una provetta contenente un po' d'acqua sterilizzata, e ripetendo l'operazione finché, agi- 

 tando la provetta, non si ottenesse un visibile intorbidamento del liquido. 



b) Inoculazione. I semi venivano prima immersi in una soluzione di sublimato corro- 

 sivo all' 1 % 0 per 5 minuti, e poi lavati molte volte in acqua sterilizzata ('). Dopo averli fatti 



( l ) Hiltncr und StOrmer, JVeue Unters. uber die Wurzelknòl. der Legumin. u. deren 

 Errer/er. Arb. aus der Biol. Abt. fiir Land, etc. Gesund., Voi. IV, pag. 302. rigon- 

 fiare in acqua per 10-12 ore, venivano di nuovo lavati con acqua sterilizzata e collocati 

 su capsule di vetro nel cui fondo erano distesi alcuni fugli di carta bibula, il tutto ste- 

 rilizzato a secco. Contemporaneamente si preparavano colture di bacteri o su piastre di 



