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Altri tentativi d'isolamento del bacterio specifico furono fatti, con tuber- 

 coli di piante seminate il 20 marzo 1906, con gelatina o agar al glucosio 

 più peptone o estratto concentrato secco di radici di sulla in proporzioni 

 ben definite (0,5 %) ; con queste culture isolai quattro bacteri diversi di 

 cui tre corrispondevano a tre della serie precedente e uno era nuovo. 



Le colture pure di uno di questi bacteri, il quale era già stato isolato 

 anche negli esperimenti precedenti, e che si distingueva per la formazione 

 di colonie bianche, irregolari, molto prominenti, di aspetto e consistenza 

 mucillagginosa, per la forma allungata e per la scarsità delle forme mobili 

 e perchè non fluidificante la gelatina, dette formazione di tubercoli su gio- 

 vani piantine circa 35 giorni dopo l'infezione. Gli altri tre si mostrarono 

 inefficaci. 



Colla speranza di trovare i bacteri più virulenti, ho fatto prove di iso- 

 lamento con tubercoli di Sulla spontanea raccolta a Ponte Galera presso 

 Roma. Questi mi hanno data una sola specie di bacteri distinguibili per le 

 colonie biancastre, piccole, tondeggianti o discoidali, superficiali e profonde e 

 di consistenza leggermente mucosa, per la forma alquanto allungata e per 

 l'abbondanza di forme mobili. Questi bacteri hanno prodotto tubercoli in due 

 serie di esperienze successive: la prima volta 27 giorni, la seconda un mese 

 dopo l'inoculazione. 



Infine un'altra serie di tentativi fu eseguita con culture gentilmente 

 favoritemi dal prof. Strampelli ('). Erano tre bacteri: uno rosso, uno bianco 

 ed uno giallo e, secondo le affermazioni orali del prof. Strampelli stesso, il 

 più virulento era il rosso. Inoculai tutti e tre i bacteri su piantine di Sulla 

 ed ottenni formazione di tubercoli da tutti e tre; ma in una successiva prova 

 d'inoculazione, alla quale i bacteri arrivarono dopo essere necessariamente 

 stati passati più volte su gelatina con estratto di radici di Sulla, tutti e tre 

 si sono mostrati inattivi. 



Rimaneva a decidere se e quale dei batteri da me isolati fosse il vero 

 agente in confronto agli altri, e a questo scopo ho ripetute le esperienze con 

 tutti i bacteri che avevo precedentemente isolati e con quelli del prof. Stram- 

 pelli. Ma questa volta il solo bacterio di Ponte Galera ha riprodotto tubercoli : 

 infatti in tutti i vasi infettati il 2 maggio 1907 ed esaminati il 1° luglio, 



gelatina nutritiva o su mezzi liquidi (soluzioni di peptone e glucosio, o di estratto di 

 radici di sulla e glucosio). Quando le radichette erano fuoriuscite dai semi per 5-15 min, 

 i semi stessi venivano gettati o sulle piastre di gelatina fluidificata a 25° o sui recipienti 

 con substrati liquidi, lasciandoveli per alcuni minuti. Indi venivano seminati sui vasi 

 versandovi poi sopra il materiale bacterifero. I vasi di cultura, lavati accuratamente in 

 acqua corrente, venivano sterilizzati mantenendoli per 6-7 ore in stufa di Koch. La sabbia 

 adoperata era stata precedentemente sottoposta all'arroventamento per circa 24 ore. 



(') Strampelli N., Colture di bacteri azoto fagi per la Sulla, Bull. Off. Min. Agricol- 

 tura, I. e C, anno IV, 1905, voi. II, pagg. 740-42. 



