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Questa localizzazione, beninteso, si presenta all' inizio della diffusione, e 

 specialmente nei tessuti limitrofi alle ulceri; quando poi queste ultime sono 

 molto depresse ed estese, come avviene quando il picciuolo, tenuto più giorni 

 in camera umida, sta per putrefarsi interamente, allora non è più il caso di 

 parlare di localizzazioni giacché i bacilli si riscontrano anche nelle porzioni 

 floematiche dei fasci che vengono anzi distrutti insieme ai tessuti circostanti, 

 formando delle grandi cavità lisigeniche. 



Nelle porzioni di picciuolo fortemente, infette ma non ancora totalmente 

 decomposte, sono assai interessanti ed istruttive le preparazioni che permet- 

 tono di mostrare i rapporti tra il bacillo é i tessuti dell' ospite, preparazioni 

 non molto facili ad eseguirsi perchè i tessuti alterati sono estremamente 

 molli, sia per la quantità d' acqua che contengono, sia perchè in via di pu- 

 trefazione. Le porzioni di tessuti infetti non si possono indurire e fissare 

 coli' alcool assoluto, perchè esso per la rapida sottrazione dell' acqua contrae 

 e deforma gli elementi ed i contenuti, compresi i bacteri, in guisa che essi 

 divengono irriconoscibili. 



L' indurimento dei tessuti da sezionare si ottiene invece lasciando i 

 frammenti per 48 ore in un liquido costituito da 100 parti di acqua distil- 

 lata, alla quale si aggiunge una parte d'acido acetico glaciale e una parte 

 d' acido cromico ; il frammento così trattato, dopo circa 48 ore, si può mettere 

 nell' alcool a 70° e quindi nell' alcool assoluto per completare l' indurimento. 



I pezzi induriti si lasciano quindi imbevere di una soluzione di paraffina 

 nel cloroformio, per circa 24 ore in recipiente chiuso ; si versa quindi la solu- 

 zione di paraffina in un piccolo recipiente o in una scatolina di carta, ponendovi 

 i frammenti di tessuto e lasciando essiccare all' aria. I tessuti così inclusi si 

 sezionano ottimamente a mano o con un piccolo microtomo. 



Si ottengono poi eccellenti colorazioni doppie per mettere in evidenza i ba- 

 cilli nelle sezioni dei tessuti col metodo seguente : liberati i tagli dalla paraffina 

 tenendoli pochi minuti nel cloroformio agitandoli continuamente, si lavano a 

 lungo con acqua distillata calda, s'immergono in una soluzione acquosa all' 1 %o 

 di verde di metile, e si lasciano ivi per circa tre o quattro ore, dopo il qual 

 tempo si passano in acqua distillata acidulata con acido idroclorico ; con tale 

 trattamento i bacilli colorati in verde non si scolorano nell' acqua acidulata, 

 mentre il tessuto fondamentale, le membrane e i contenuti cellulari si de- 

 colorano totalmente; si trasporta allora la preparazione, decolorata al punto 

 giusto, in una soluzione acquosa di picro-carminio, nella quale si lasciano le 

 preparazioni per circa un'ora, poi si lavano, si disidratano, si impregnano 

 coli' olio di garofano e si montano in balsamo. In tal modo nelle prepara- 

 zioni ben riuscite i bacilli colorati in verde spiccano sul fondo rosso dei 

 contenuti protoplasmatici delle cellule e roseo delle membrane. Una buona 

 colorazione pure caratteristica, si ottiene col violetto di genziana all'acido 

 acetico (acqua p. 100, acido acetico p. 10, soluzione alcoolica satura di vio- 

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