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J.-L. PERROT 



la coloration de Feulgen, gardent une transparence bien suffisante 

 pour que la définition des chromosomes soit parfaite. En coupant 

 à 15 microns, on obtient des métaphases complètes en suffisance. 



Méthode de coloration et de montage « in toto ». 



Pour éliminer toute erreur pouvant résulter de la confection des 

 coupes, j'ai essayé de colorer et de monter les ovocytes in toto. 

 Metz, travaillant sur des œufs de Sciara, a décrit une telle méthode 

 basée sur la coloration de Feulgen. Malheureusement cette réaction 

 ne s'applique pas bien aux ovocytes de Limnées, dont le vitellus se 

 colore en rose par la fuchsine sulfureuse. La définition des éléments 

 chromatiques n'est donc pas bien précise. 



Voici le procédé que j'ai employé avec succès. Après le lavage à 

 l'eau qui suit la fixation au sublimé acétique, les ovocytes sont 

 débarrassés de leur albumine, comme il a été décrit plus haut, puis 

 transportés à la pipette sur une lame de verre. Pour mettre en 

 évidence les figures mitotiques, l'hémalun acide donne, s'il est 

 employé judicieusement, de bons résultats. 11 faut toutefois précéder 

 la coloration d'une hydrolyse par HC1 normal à la température de 

 55°-60° — comme avant la réaction de Feulgen — pendant 5 à 

 10 minutes. Le vitellus, de jaune qu'il est normalement, se décolore 

 complètement par ce procédé et devient transparent. L'hémalun ne 

 s'y fixe que faiblement et la netteté des figures chromosomiques est 

 très favorable à une numération des éléments chromatiques, qui eux 

 prennent une belle teinte bleu foncé. La différenciation se fait à l'alcool 

 acide sous le microscope. Tous les changements de liquide doivent se 

 faire à la pipette, l'ovocyte restant sur la lame de verre pendant toute 

 la durée des manipulations. Après lavage, déshydratation et éclair- 

 cissement au toluol, l'ovocyte est monté dans une goutte de baume 

 de Canada recouvert d'une lamelle très mince. Si la couche de baume 

 est suffisante, on ne risque pas d'écraser l'ovule, qui peut être sondé 

 dans toute son épaisseur (60 M) avec une immersion 1 12 e . 



L'ovocyte, libre dans les gouttes de liquide, se place presque 

 toujours de lui-même sur l'axe de la cinèse lors de la première 

 division de maturation. La numération est donc aisée puisque la 

 métaphase se présente de face à l'examen microscopique. 



Il y a donc une orientation naturelle très favorable de la plaque 

 équatoriale provenant vraisemblablement de différence de densité 

 du vitellus ou du protoplasme. 



