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Boletim Biologico (Nov. Ser.) Vol. II, No. 3 
MÉTODO PRATICO PARA CULTURA E ISOLAMEN- 
TO DAS LARVAS DE NEMATOIDES MONOXENOS DE 
PENETRAÇÃO ACTIVA 
Por C. PEREIRA 
(Trabalho do Instituto Biologico) 
Já são numerosas as técnicas usa- 
das para a cultura e isolamento das 
larvas de nematoides monoxenos de 
penetração ativa. Hm geral, as técni- 
cas existentes adotam um procedi- 
mento para a cultura e outro para 
o isolamento de larvas. No decorrer 
de nossos estudos sôbre helmintóses 
de cabras tivemos ocasião de encon- 
trar uma técnica que permite ao mes- 
mo tempo a cultura e o isolamento 
automático das larvas dos helmin- 
tos dêste tipo biológico. 
Para êste fim, coloca-se cm uma 
placa de Pettri certa quantidade de 
terra sêca e previamente aquecida a 
60° C., o suficiente para recobrir o 
fundo da placa; sôbre a terra espa- 
lha-se fina camada de fezes que em 
seguida c recoberta por nova camada 
de terra suficientemente espessa para 
recobrir completamente as fezes. A 
camada superficial de terra tem por 
fim impedir ou pelo menos retardar 
o desenvolvimento de cogumelos. 
Feito isso humidece-se a terra tendo 
o cuidado de evitar excesso de água. 
Aplica-se sôbre o rebordo da placa 
uma camada de cêra de abelhas; 
aquece-se a tampa da placa e é ela 
então aplicada sôbre o fundo con- 
tendo o material humedecido. A cê- 
ra funde e ao tornar a solidificar fe- 
chará ermeticamente a placa, impe- 
dindo a evasão de larvas e consequen- 
te perigo para o operador. 
Depois de processada a eclosão dos 
óvos, as larvas irradiam em todas as 
direções, procurando abandonar o 
( Trabalho apresentado á “ Semana do 
Laboratorio”, realizada em S. Paulo cm 
1931 ). 
meio onde nasceram, o que as leva 
gradualmentc a se acumularem na 
periferia da placa. Ora, como a tam- 
pa da placa foi aquecida fortemente 
ao ser aplicada sôbre o respetivo fun- 
do, isso acarreta evaporação de parte 
da água que embebia o meio de cul- 
tura, e, por ocasião do resfriamento, 
essa água vaporizada irá se conden- 
sar finamente em gotículas sôbre a 
tampa e as paredes verticais da pla- 
ca. A’ medida que se dá a eclosão dos 
ovos dos nematoides, as larvas, que 
irradiam em todas as direções, ten- 
dem a se acumular na periferia da 
placa; alí chegando, aplicam-se sô- 
bre o filme de água de condensação, 
subindo por êle, de modo a virem se 
achar em breve tempo sob a coberta 
da placa. Dada a tendencia que as 
larvas têm de se agruparem forman- 
do “mechas" de larvas, elas acabam 
provocando a fusão de gotículas vi- 
zinhas de líquido em gotas de tama- 
nho relativamente grande; portanto, 
as larvas acabam geralmente incluí- 
das em verdadeiras gotas pendentes 
permanecendo apoiadas sôbre a mem- 
brana de tensão superficial das go- 
tas. Ora, dada a incapacidade das 
das larvas para a locomoção em meio 
liquido, ou melhor para a natação, 
estas ficam prisioneiras das gotas 
cuja formação provocaram. Poucos 
dias após a eclosão dos ovos temos 
praticamente a totalidade das larvas 
aprisionadas sob a tampa da placa 
de Pettri, o que pode ser acompa- 
nhado facilmente pelo exame da pla- 
ca ao microscopio de dissecção. 
Para colhermos as larvas é o bas- 
tante retirarmos a tampa da placa, 
operação que não offerece dificulda- 
