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Koeller, 
kanntlich die derberen Sporen entweder trocken zu erhitzen, sei es 
im Trockenschrank, sei. es durch häufigeres Durchziehen durch die 
Flamme, um die Sporeumembran dadurch leichter durchlässig für 
den Farbstoff zu machen, oder die Sporen direkt in der Farblösung 
eine Stunde zu erhitzen. Der schweren Färbung der Sporen ent- 
spricht eine schwierige Entfärbung, weiche ja in dem übrigen Bakterien* 
Protoplasma leicht zu ermöglichen ist durch Verwendung von Alko- 
hol uud verdünnten Säuren und alsdann eine Neufärbung des letz- 
teren mit einer Gegenfarbe nach Neisser ermöglicht. 
Diese Spcrenwand scheint nun entsprechend der Widerstands- 
fähigkeit der Sporen gegen schädigende, äussere Einflüsse verschieden 
derb und durchlässig zu sein, wie ja einige endogene Sporen dieser 
Doppelfärbung ohne weiteres zugänglich sind, andere es erst durch 
das obenerwähnte Erhitzen werden. Durch das letztere wird offen- 
bar ein starker Eingriff in die Beschaffenheit der Membran hervor- 
gerufen, den ich rascher und im Einzelfalle zuverlässiger durch die 
Verwendung von Mazerationsmitteln zu erreichen hoffte,, deren wir 
uns in der botanischen Histologie zu ähnlichen Zwecken bedienen. 
Ein überraschender Erfolg lohnte gleich den ersten Versuch. 
Als Untersuchungsmaterial benutzte ich die Reinkultur eines Kar- 
toffelbacillus, der eine bräunliche Haut lieferte. Pis wurden stets 
Deekglaspräparate angefertigt und zur Untersuchung verwendet. Bei 
der. ersten Versuchen fixirte ich durch dreimaliges Durchziehen durch 
die Flamme ; später habe ich durchgängig, um die verschiedene Wir- 
kung dieses nie gleichmässigen Prozesses auszuschliessen, die luft- 
trockenen Deckgläschen zwei Minuten in absoluten Alkohol gebracht, 
mit Wasser gründlich abgespült und weiter verarbeitet. Zunächst 
untersuchte ich die Wirkung des Chlorzinkjod in konzentrirter Lö- 
sung, welches ja veränderte Cellulose, iignin- und suberinhaltige 
Membranen, sowie die Aussenmembran der Sporen und Pollenkörner 
leicht durchdringt und gelb färbt Gleich gelb färbte sich, nach we- 
nigen Sekunden das mit einigen Tropfen des Chlorzinkjod bedeckte 
Deckglas. Es wurde nun sorgfältig abgespült und mit Karbolfuchsin 1 ) 
mehrmals aufgekocht, abgespült und durch Behandlung mit 4 rt / ö 
Essigsäure und verdünntem Alkohol zu entfärben versucht. Es ge- 
lang, den gefärbten Sporen (ein Theil war nur eben ungefärbt) den 
Farbstoff zu lassen und ihn sonst zu entfernen, so dass die Doppel- 
färbung mit Methylenblau gleich am ersten Präparat gelang, wenn 
dasselbe auch sonst noch mangelhaft war. Nachdem durch circa 
5 Minuten langes Einwirken des Chiorzinkjoös eine Färbung sämmt- 
licher Sporen gelungen war, galt es durch weitere Versuche eine ge- 
eignete Differenzirungsflüssigkeit wie die Dauer der Gegenfärbung zu 
ermitteln. 
Von der 1 r, j 0 Schwefelsäure gelangte ich in weiteren Versuchen 
zur 5 °/ ö , welche ich beibehalten habe. Das Deckgläschen wird darin 
kurz abgespüit, bis es entfärbt ist, und dann mit Wasser gründlich 
abgespült. Als Gegenfarbe habe ich anfangs wässerige oder alka- 
1) Pas Ksrbcls'acfcsia ‘•rie <iie andern Fsr&iosungeo bereitete ick ohne Aikoholiusatz, 
weil es tair wiederholt schien, dass letzterer die F&rbkr&ft beeinträchtige. 
