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Büchner, 
pyogen wirkte, diese Wirksamkeit durch Zusatz von wässeriger 
Methylviolettlösuug vollkommen verlor. 
Es handelte sich zum endgültigen Beweis um die Isolirung 
der wirksamen Substanz aus dem Bakterienkörper. Die Schwierig- 
keit dieser Aufgabe liegt darin begründet, dass die Membran der 
Bakterienzelle einfachen Extraktionsmitteln einen grossen Wider- 
stand entgegensetzt. Es mag das für verschiedene Bakterienarten 
in verschiedenem Grade gelten ; beim Pneumobacillus jedenfalls ist 
es nicht leicht, die Albuminate des Inhalts in Lösung überzuführen. 
Nach mehreren vergeblichen Versuchen wurde das von Nencki 
zur Darstellung des Mykoprotei'n aus „Fäulnissbakterien“ benutzte 
Verfahren eingeschlagen. Von 25 Kartoffelkulturen (10 Tage bei 
12 — 18 0 C kultivirt) wurden die Pneumobacillen vorsichtig, unter 
Vermeidung der Mitnahme von Partikelchen des Nährbodens, ab- 
gestreift und in etwa der 20fachen Menge 0,5 proc. Kalilauge ver- 
theilt. Hierbei verwandelt sich die Bakterienmasse alsbald in einen 
zähen, klumpigen Schleim, eine Erscheinung, die möglicherweise 
durch Aufquellen der Bakterienmembran bedingt ist. (Bei Bacillus 
cyanogenus und prodigiosus zeigt sich dieselbe Erscheinung, bei 
Bacillus subtilis, coli communis und Typhusbacillus fehlte dieselbe.) 
Dieser zähe, dicke Schleim löst sich aber bei der folgenden Digestion 
auf kochendem Wasserbade rasch ; nach mehreren (4—7) Stunden 
ist der grösste Theil der Bakterienkultur in Lösung übergeführt, 
und man erhält bei wiederholtem Filtriren ein klares, gelbbräunliches 
Filtrat. Aus letzterem wurde der darin enthaltene Proteinstoff, 
in unserem Falle „Pneumobacillenprotexn“ , gefällt durch vorsich- 
tiges Ansäuern bis die Reaktion gerade deutlich sauer ge- 
worden ist. Jeder Ueberschuss von Säure ist zu meiden, denn 
er löst von neuem das soeben gefällte Protein. Der Rückstand 
wurde vom Filter genommen, in stark verdünnter Kalilauge gelöst, 
nochmals durch Säure gefällt und dies ganze Verfahren ein drittes 
Mal wiederholt. Der zuletzt erhaltene Filterrückstand wird endlich 
in wenig Wasser mit so viel Sodazusatz, als gerade zur Neutrali- 
sation hinreicht, aufgelöst. 
Dieses gereinigte Pne umob a eil len pro t ein erweist sich 
durch sein Verhalten zweiffellos als Eiweisskörper; es giebt sehr 
deutlich die Xanthoprotein-, die Millon’sche, die Biuretreaktion 
und prachtvolle Violettfärbung mit Eisessig und konzentrirter 
Schwefelsäure. In seinem übrigen Verhalten nähert es sich am 
meisten dem von Nencki und D y r m o n t aus Milzbrandsporen 
dargestellten „Anthraxprotein“, welches den Pflanzenkaseinen ähn- 
liche Eigenschaften aufweist. 
Mit dem gereinigten Pneumobacillenprotein wurden nun Thier- 
versuche angestellt. Frisch ausgezogene Glasröhrchen, 5 cm lang, 
im mittleren Theil 6 mm weit, mit verjüngten Enden, wurden mit 
einer ca. 10 proc. Lösung desselben gefällt, auf beiden Seiten zu- 
geschmolzen und dann zur Sterilisirung 1 Stunde im kochenden 
Wasserbad erhitzt Hierauf wurden dieselben unter aseptischen 
Vorsichtsmaassregeln einem grossen Kaninchen in der Kreuzbein- 
gegend unter die Haut eingeführt, mit den Fingern im lockeren 
