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ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR 
au microscope, 24 heures après son ensemencement, l’une de 
ces cultures ne présente que de rares éléments mobiles : 
1 agglutination sous l’action du sérum normal de cheval est 
quasi complète. On ne trouve plus trace de vibrions mobiles à 
partir du 4 e jour. 
Nous constatons également à T examen des lames colorées 
des modifications très importantes dans la morphologie de ce 
microbe. De très bonne heure en effet, apparaissent des formes 
filamenteuses, arrondies, en poire, qui augmentent rapidement, 
et dès le 4e jour, on n’aperçoit guère dans le champ du micros- 
cope que des éléments arrondis prenant très mal les matières 
colorantes. 
Une trace de cette culture, repiquée chaque jour sur gélose 
et sur bouillon, cesse de donner une nouvelle culture à partir 
du 4 e jour, quelquefois même dès le 3 e . 
En résumé, la production de cette toxine semble se faire 
en deux temps. Le 1 er , qui va jusqu’au 3 e jour, est caractérisé 
par un développement intensif de la culture. Le 2 e , qui s’étend 
du 3 e au 7 e jour, est surtout une macération des vibrions dans 
le sérum. 
Quand on veut, par ce procédé, obtenir une toxine présen- 
tant son maximum d’activité, il paraît indispensable d’observer 
les prescriptions suivantes : 
1° Le sérum entrant dans la composition de ce milieu doit 
être âgé d’au moins trois semaines. Il est presque impossible 
d’obtenir des cultures toxiques avec du sérum frais. Les mêmes 
remarques s’appliquent au sang défibriné. Enfin, comme nous 
l’indiquons plus haut, ce milieu doit être maintenu à la tempé- 
rature de 60° à 61° pendant 3 heures ; 
2° La richesse d’une culture, et conséquemment sa toxicité 
sont en raison directe de l’abondance de l’ensemencement. Il 
faut en moyenne 2 tubes de gélose de 24 heures pour 50 c. c. 
du milieu de culture ; 
3° Comme l’ont indiqué MM. Metchnikoff, Roux et Salim- 
beni dans leur mémoire, l’aération joue un grand rôle dans le 
développement de la toxicité. Aussi cultivons-nous comme eux 
en large surface et mince épaisseur. Pour augmenter encore 
cette aération les boîtes sont agitées chaque jour; 
L’étuve dont on fait usage doit avoir une température 
