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ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR 
Méthodes expérimentales. 
Le microbe est cultivé dans un bouillon minéral peptoné à 
0,5 p. 100 ou nitraté et additionné de 3 ou 4 p. 100 de sucre, 
et contenu dans des ballons de un ou trois litres. Chaque ballon 
est fermé par un bouchon à deux tubulures obturées par des 
baguettes de verre. Tous les joints sont sous le mercure. Les 
manipulations sont faites aseptiquement avec des objets stériles 
et la pureté des cultures a été fréquemment vérifiée. Les 
ballons sont mis à 30 degrés 
L’analvse est faite en une ou deux fois. Dans ce dernier cas, 
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après une extraction incomplète, je laisse rentrer de l’air, à 
travers un coton stérile, et je ferme le ballon : la culture con- 
tinue avec une nouvelle provision d’oxygène. 
L’extraction dos gaz est faite par une des tubulures à l'aide 
d’une pompe à mercure. A la fin, le ballon est mis dans l’eau 
chaude et on y fait entrer, par la seconde tubulure, un peu 
d’acide sulfurique dilué qui met en liber lé tout l’acide carbo- 
nique. Les gaz sont recueillis dans un volumètre de deux litres : 
s’il y en a plus de deux litres, on fait l’extraction en deux 
fois. 
L’analyse est faite dans un eudiomètre. L'acide carbonique 
est absorbé par la potasse; l’oxygène, dosé par combustion dans 
l’hydrogène; l’hydrogène, recherché par combustion dans l'oxy- 
gène en présence de gaz tonnant et le protoxyde d’azote par 
combustion dans l’hydrogène après absorption de l’oxygène par 
le pyrogallate alcalin. 
Tous les volumes sont amenés à 0° et 760 mm et on tient 
compte dans les calculs des corrections dues à la tension de la 
vapeur d’eau et aux dilatations des colonnes mercurielles du 
baromètre et des manomètres. 
Des expériences m’ont prouvé que la combustion des matières 
azotées par les bactéries du groupe du B. subtilis n’entraîne ni 
gain ni perte d’azote. Cet élément me permet donc de tirer de 
la composition finale de l’atmosphère sa composition initiale 
et, par suite, de calculer les échanges gazeux qui se sont pro- 
duits. 
