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ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR 
Quoi qu'il en soit, il m’a semblé préférable de renoncer à 
l’emploi du sulfate mercurique. Comme le liquide d'hydrolyse 
débarrassé d'acide sulfurique par la baryte est encore un peu 
coloré en jaune et qu’il précipite légèrement par addition de 
réactif de Millon, je l’ai additionné de nitrate mercurique tant 
qu'il se fait un précipité, mais en évitant soigneusement un 
excès. En ajoutant alors le réactif de Millon, on a une colora- 
tion normale, augmentant peu à peu d'intensité et atteignant 
son maximum après environ deux heures. Lorsque le liquide 
ne précipitant plus par le nitrate mercurique est encore légère- 
ment coloré- en jaune, on peut le décolorer complètement en 
l'agitant avec un peu de hon noir animal lavé. 
Voici exactement le mode opératoire que j’ai adopté : 
On commence par sécher soigneusement le protéique à étudier, réduit en 
poudre fine, en le chauffant à 100°-105° jusqu’à poids constant, puis on en 
prélève exactement 2 grammes, que l’on introduit dans un matras à long 
col, du type employé pour les attaques Kjeldahl avec 3 c. c. 5 d’acide sulfu- 
rique concentré et pur et 21 c. c. 5 d’eau. On introduit un petit fragment de 
brique pour régulariser l’ébullition et on maintient celle-ci pendant douze 
heures, le col du ballon portant un réfrigérant de Hopkins, selon le dispo- 
sitif très pratique indiqué par Folin et Denis dans leur mémoire. 
Après refroidissement, on filtre dans une fiole jaugée de 100 cent, cubes à 
col large (ce qui facilite les opérations ultérieures] on lave les matières 
humiques avec le moins d’eau possible et on précipite aussi exactement que 
possible l'acide sulfurique par une solution chaude et concentrée d’hydrate 
de baryte, débarrassée de carbonate par tiltration (il faut théoriquement 
21 grammes d’hydrate de baryte). La présence de carbonate donnerait une 
mousse très gênante qu’il faut éviter. On essaie de temps à autre la réaction 
du liquide; lorsque l'on est arrivé à la neutralité, on ajoute quelques gouttes 
de solution barytique jusqu’à faible alcalinité et on neutralise de nouveau 
par quelques gouttes d’acide nitrique étendu. On refroidit, on mélange, 
puis on ajoute encore 2 cent, cubes d’acide nitrique et assez d’eau pour 
compléter le volume à 100 cent, cubes. On agite bien pour mélanger, on 
laisse déposer et on filtre avec un entonnoir de Joulie (ou à la trompe, ou 
encore on centrifuge). 
On recueille exactement 30 cent, cubes dans une fiole jaugée de 30-55 cent, 
cubes, et on précipite par la quantité juste nécessaire d’une solution de 
nitrate mercurique pur à 20 p.100, ce qui élimine le tryptophane. 11 importe 
absolument d’éviter un excès. Si, le liquide surnageant, le précipité est 
encore coloré, on ajoute une pincée de noir animal lavé, on complète à 
35 cent, cubes, on agite et on filtre rapidement. Si on a bien opéré, le dernier 
liquide ne doit pas se troubler par addition de nitrate mercurique, non plus 
que par le nitrate de baryum. On prélève exactement 10 cent, cubes de ce 
liquide, que l’on mélange avec 2 cent, cubes de réactif de Millon et que l’on 
examine au colorimètre Duboscq après un temps convenable, en prenant la 
moyenne de quatre lectures. 
