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ANNALES DE L’INSTITUT PASTEUR 
C’est bien là un procédé classique d’isolement des aérobies 
ou des facultatifs, et non des anaérobies. 
En résumé, de tout ce qui précède, il résulte que la question 
de l’existence des microbes thermophiles anaérobies stricts nous 
a paru être restée entière ou seulement effleurée. C’est pour- 
quoi nous avons voulu voir s’il était possible d'en isoler et 
étudier quelques espèces en employant les procédés modernes 
d’isolement et de culture des anaérobies stricts. 
TECHNIQUE EMPLOYÉE 
Isolement. — Pour isoler les microbes qui nous intéressaient 
nous avons employé la technique suivante, seule d'un emploi 
pratique pour l'isolement et la culture des anaérobies. Elle 
repose sur le principe des cultures en couche profonde dans un 
milieu solide débarrassé d’oxygène par l’action permanente 
d’un corps réducteur qui lui est incorporé. 
Pour faire l'isolement, nous faisions fondre au bain-marie 
à 100°, pendant dix à quinze minutes, une dizaine de tubes de 
gélose glucosée en couche profonde, que nous placions ensuite 
dans de l'eau à 38°, ce qui permet au milieu de rester en 
surfusion, donc encore fluide pendant toute la durée de l’ense- 
mencement. Puis, à l’aide d’une pipette flambée à longue 
effilure, nous portions dans un premier tube un peu du matériel 
à ensemencer (dans le cas particulier ce fut soit des fragments 
de fumier, soit quelques gouttes de purin), que nous délayions 
le plus parfaitement possible par agitation prolongée dans 
toute la longueur du tube, de façon à faciliter la dissémination 
des germes; et sans la recharger, toujours en l'agitant, mais 
moins longtemps, nous transportions successivement la même 
pipette dans les autres tubes. Ceux-ci étaient alors plongés 
dans l’eau froide pour solidifier rapidement la gélose. Cher- 
chant à isoler des espèces thermophiles, nous placions les tubes 
dans l’eau d’un bain-marie (1) dont nous fixâmes la tempé- 
rature d’abord à 50° et par la suite élevâmes jusqu’à 53° et 58°. 
(1) Le bain-marie est bien préférable à l’étuve à air chaud quand il s’agit 
d’obtenir une température élevée et constante. 
