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Das Impfmaterial für die Petri’sehen Schälchen wird direct den Knöllchen 
der betreffenden Leguminosengattung entnommen. Um die Knöllchen äusserlich von 
anhaftenden Organismen zu reinigen, werden sie ganz kurze Zeit in Sublimat gelegt, 
dann mit Alkohol abgespritzt und dieser an einem Spirituslämpchen entflammt. Hierauf 
wird das Knöllchen zerschnitten, mit einem sterilen Platindraht wird etwas Substanz 
herausgenommen und auf die Gelatine gestrichen, wobei der Deckel des Schälchens nur 
wenig gelüftet wird, um den Zutritt fremder Keime zu verhindern. Man stellt so 4 bis 
5 Impfstriche in einem Schälchen her. Das beste Impfmaterial liefern junge Knöllchen 
oder solche, die erschöpft sind durch sogenannte Bakterien-Ueb er Wucherung, d. h. 
in denen eine Umwandlung in die erwähnten Bakteroiden nicht stattgefunden hat. 
Finden sich trotz aller Vorsicht in den Impfstrichen oder neben diesen fremde Spalt¬ 
oder höhere Pilze, so hat eine Ueberimpfung zu erfolgen, und diese Operation ist bis 
zur völligen Reinheit der gebildeten Colonien zu wiederholen. 
Von der fertigen Cultur wird für die Gewächshaus-Versuche eine kleine Menge in 
Wasser gebracht und die Emulsion der Versuchserde einverleibt. Als soche Versuchs¬ 
erde verwenden wir theils einen reinen stickstofffreien Tertiärsand, theils einen solchen 
mit 7a —7a Volumen Gartenerde von bekanntem Stickstoffgehalt gemischt. Die Mischung 
erfolgt, um die physikalische Beschaffenheit des Bodens zu verbessern und zugleich den 
Pflanzen in der Jugendperiode eine kleine Menge Stickstoff darzubieten. In dem reinen 
Sande ist zwar die Impfwirkung energischer, aber die jungen Pflanzen gehen oft früher 
zu Grunde, als die Spaltpilze zur Wirkung gelangen können. In kranke Wurzeln treten 
sie nicht ein. In jedem Falle wird der Boden vor der Impfung durch mehrmaliges Er¬ 
hitzen auf 100—105° C. von allen Mikro-Organismen befreit, die ein verwirrendes Durch¬ 
einander von Actionen ausüben würden. Der Impfstoff wird in die Versuchsgefässe 
mittelst einer festgelegten gebogenen Glasröhre etwa 10 cm tief eingebracht; die Ober¬ 
fläche des Bodens wird mit steriler Watte bedeckt, welche am Rande des Cylinders von 
einem übergreifenden Zinkringe in ihrer Lage festgehalten wird. Auch das ßegiessen 
mit mehrfach ausgekochtem Wasser erfolgt durch die erwähnte Glasröhre. Nur unter 
Einhaltung so vieler Vorsichtsmassregeln ist man sicher, an den Versuchspflanzen nur 
da Knöllchen auftreten zu sehen, wo man sie planmässig durch die Impfung hervorruft; 
und nur so kann die Wirkung der Knöllchenbakterien rein studirt und ein sicheres 
Fundament geschaffen werden für die praktische Impfung der Felder. 
Für die Bodenimpfung des freien Feldes wird das auf die Fläche bemessene 
Impfmaterial sammt der durch schwache Erwärmung verflüssigten Gelatine in Wasser 
gegossen, die Samen werden hineingeschüttet und tüchtig durchgearbeitet. Die an¬ 
gewandte Wassermenge wird so berechnet, dass nach dem Zuschütten der Samen ein 
kleiner Ueberschuss bleibt, der nachträglich durch Zusatz von etwas trockenem Sande 
oder Erde von dem anzubauenden Felde aufgenommen wird, so dass die Samen sich 
lufttrocken leicht ausstreuen lassen. Das ist die Samenimpfung. Ein zweites Ver¬ 
fahren, die Erdimpfung, besteht darin, dass statt der Samen soviel Erde oder Sand 
in die Bakterien-Flüssigkeit geschüttet und mit ihr innig vermischt wird, bis auch hier 
ein lufttrockener Zustand die Ausstreuung gestattet. Dies Verfahren der „Erdimpfung“ 
hat den Vortheil, dass man die ausgestreute Impferde vor der Aussaat 5 —10 cm tief unter¬ 
arbeiten kann. Denn die spontane Beweglichkeit der Bakterien im Boden ist nicht gross. 
Diese Versuche haben nun bis heute unzweifelhaft festgestellt, dass dasjenige Impf¬ 
material, welches aus Knöllchen der zu cultivirenden Leguminose gezüchtet 
worden ist, in allen Fällen die weitaus kräftigste Wirkung ausübt, ja dass eine volle 
Impfwirkung mit Sicherheit nur dann eintritt, wenn der Boden mit Bak¬ 
terien aus Knöllchen der angebauten Leguminose geimpft wird. Impf¬ 
material aus nahe verwandten Leguminosen-Gattungen vermag, in mehr oder minder 
geschwächter Wirkungskraft, gegenseitig zu fungiren. 
Eine Frage von grossem praktischen Interesse ist die: wie wirken die Bakterien 
der Leguminosen in einem Boden von höherem Stickstoffgehalt? Die diesbezüglichen 
Versuche des Vortragenden haben ergeben, dass die Knöllchenbildung und Wachsthums¬ 
förderung in einem stickstofffreien oder stickstoffarmen Boden mit der relativ grössten 
Energie von Statten geht. Ein stickstoffreicher Boden, w t o mithin die Leguminosen auch 
ohne Mitwirkung von Knöllchenbakterien gut gedeihen, verlangsamt die Impf¬ 
wirkung Anfangs stark. Häufig werden Knöllchen überhaupt nicht gebildet, oder 
sie wachsen schwächer: jedenfalls bleibt die Förderung Anfangs zurück. 
Zur Erörterung der Controverse, ob die Knöllchen oder, wie verschiedene Forscher 
annehmen, die Blätter die eigentlichen Binder des freien Stickstoffs sind, wurde die 
sogenannte Wasserculturmethode und als Versuchspflanzen Erbse, Zottelwicke, 
Robiuie und Erle mit Erfolg zu Gunsten der Wurzelknöllchen verwendet. 
