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gli elementi nervosi neoformati. Quest’inconveniente esiste realmente, ma non è diffi¬ 
cile di evitarlo, liberando gli organi nervosi dai tessuti circostanti; il che si può 
ottenere con una dissezione accurata sotto il microscopio binoculare, come consiglia 
Burrows. Ma questa richiede un certo tempo e l’asepsi è spesso compromessa. 
10 preferivo per lo più di affidarmi al caso, suddividendo dapprima rapidamente 
con un paio di forbicine la regione del rombencefalo ed il tronco dell’embrione 
immersi in liquido di Ringer (') in tanti frammenti, che poi trasportavo sui vetrini 
coprioggetti; con coltellini del Orafe e con aghi da dissezione suddividevo questi 
frammenti in pezzettini piccolissimi cercando di maltrattarli il meno possibile. Poi, 
aspirato con una pipetta sottilissima il liquido di Ringer dal coprioggetti, aggiun¬ 
gevo una piccola goccia di plasma di pollo, preparato in precedenza con le norme 
ben note; avevo cura di distendere il plasma in uno straterello sottile, e poi capo¬ 
volgevo il vetrino circondandolo, come di solito, con un orlo di paraffina sul porta- 
oggetti ad incavo. 
11 plasma non deve essere abbondante, ma neppure troppo scarso; con coaguli 
tanto sottili, quali son quelli che io stesso utilizzai per lo studio citologico delle 
cellule mesenchinali in vitro, non si hanno buoni risultati per il tessuto nervoso; 
parimenti nel plasma molto diluito le fibre hanno una vitalità troppo limitata; un 
grado lieve di diluizione è invece, come vedremo, vantaggioso. 
Con questa semplice tecnica dei frammenti di rombencefalo e di midollo, e 
talora anche dei gangli, venivano ben separati dal mesenchina e dai miotomi; in 
quasi tutte le colture preparate nel modo anzidetto si aveva un accrescimento di 
fibre, prescindendo naturalmente da quelle inquinate. 
Mi riesci talora di preparare così dei pezzetti piccolissimi, di 10-5 cellule cia¬ 
scuno, e se questi non erano stati maltrattati dagli strumenti, davano origine a neuriti ; 
allora i neuroblasti si disseminavano per la coltura e diventavano direttamente acces¬ 
sibili aU’osserva/.ione, condizione, come ognuno comprende, quanto mai favorevole. 
I frammenti più grossi di miotomi e di mesencbima venivano allontanati, affinchè 
il largo alone di elementi mesenchimali, che rapidamente si sviluppa, non ricoprisse 
gli elementi nervosi. 
Le osservazioni sulla coltura vivente venivano come di consueto eseguite man¬ 
tenendo il microscopio alla temperatura di 39°-40° in un termostato Pfeiffer. Mi servii 
dell’Apocrom. Imm. Zeiss 3 mm. e di una sorgente luminosa artificiale. 
Le fibre nervose incominciano a crescere in qualche caso dopo 5-0 ore, per lo 
più dopo 12 ore; ma il periodo più adatto per le osservazioni sulla coltura vivente 
è quello dalle 14 alle 60 ore. 
Io ho fatto il possibile per studiare nei preparati fissati le stesse imagini delle 
quali avevo seguito l’evoluzione nelle colture viventi, ma questo mi riesci soltanto 
in pochissimi casi. Lo studio delle colture viventi richiede un’osservazione attenta e 
(') Come liquido di lavaggio ho adoperato talora quello di Ringer, altre volte quello di Locke 
od infine una delle formule consigliate da Lewis, nella quale al glucosio è sostituito il destrosio. 
Specialmente per le colture del tessuto nervoso è indispensabile che il liquido di lavaggio, del 
quale naturalmente una certa quantità, per quanto minima, resta nella coltura e si mescola al 
plasma, sia preparato con grande precisione. 
