DE 
rigueur il soit possible de voir certains microbes ‘sans coloration, 
ce procédé n'ést nullement à conseiller. D’abord le microbe, même 
en culture abondante est à peine visible, grâce à son peu de réfrin- 
sence, puis il est impossible d'observer sérieusement leur forme, 
tous ne pouvant pas faire la différenciation élémentaire que per- 
mettent les doubles colorations (Gourmont). 
Coloration des bactéries. — Coloration simple. Après avoir étalé 
et fixé la matière comme nous l'avons vu, on fait tomber sur le 
frottis quelques gouttes d'un des colorants suivants: Violet de 
gentiane phéniqué, Bleu de Khune, Bleu polychrome de Una, 
Fuchsine de Ziel ou Thionine phéniquée. 
Le violet de gentiane est un colorant énergique : une minute de 
contact au plus, est suffisante. Le Bleu de Khune est plus lent : 
il faut de 3 à 5 minutes. Le Bleu polychrome de Una est très pra- 
tique pour les colorations de bactéries (Renchèse). 
La Thionine phéniquée ne surcolore pas ; elle constitue le réac- 
tif colorant le plus énergique et le plus sûr, grâce à son affinité 
pour les microbes et sa faible solubilité dans Falcodl absolu. On 
la läisse en contact de 30 à 60 secondes {(Courmont). 
Lorsque le temps voulu de coloration s'est écoulé, on lave à 
grande eau, on dessèche et on examine à l'objectif à immersion. 
Double coloration. Les doubles colorations sont employées tou- 
tes les fois qu'on soupçonne un mélange de bactéries diverses ; 
ce qui est presque toujours le cas, sauf lorsqu'on examine des cul- 
tures. Elles permettent de différencier des microbes de morpholo- 
gie semblable, mais de propriétés et d'espèces différentes. La mé- 
thode de Gram-Nicolle, que nous allons décrire, est une des meil- 
leures : 
1. Frottis et fixation à l’alcool-éther (parties égales). 
2. Golorer au violet de gentiane phéniqué pendant 40 à 50 se- 
condes. 
3. Egoutter le colorant en excès et, sans laver, ajouter quelques 
gouttes de solution de Lugol. Contact'de une minute environ. 
4. Décolorer à l'alcool absolu jusqu’à ce que l'alcool n’enlève 
plus qu'une minime quantité de violet. Il est bon de plonger de. 
temps en temps, la lame dans l’eau, pour juger du point de déco- 
House qu'il s'agit de ne pas pousser trop loin. 
. Laver la préparation à l’eau et mettre quelques gouttes 4 
Füchsiné de Ziel. Après un contact de 30 à 40 secondes, laver, 
sécher et examiner comme précédemment. : | , 
Certaines bactéries apparaîtront en violet foncé : ce sont celles 
qui n'ont pas été décolorées par l'alcool. On dit alors qu'elles ont. 
pris le Gram ou qu'elles sont « Gram positif ». D'autres se mon- 
7 
=. 
a 
we #4 A 
