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die Eiweißlösung sorefältig gereinigt waren, die 
Zeit, welche notwendig ist, um kleine Änderun- 
gen der Viskosität oder der Leitfähigkeit des 
Eiweißkörpers durch die Einwirkung des Enzyms 
herbeizuführen, umgekehrt proportional der Kon- 
zentration des Enzyms ist, 
experimentelle Tatsache. Es kann daher die 
Quantität des vorhandenen aktiven Enzyms als 
umgekehrt proportional der Zeit angesehen wer- 
den, welche notwendig ist, um eine willkürlich 
geringe Änderung in der Leitfähigkeit oder Vis- 
kosität einer Gelatinelösung unter konstanten Be- 
dingungen (Temperatur, pq usw.) herbeizufüh- 
ren. Es wurden konzentrierte Lösungen der 
Hemmungssubstanz oder von Substanzen, welche 
durch Enzymhydrolyse einer Eiweißlösung ge- 
wonnen waren, hergestellt. Die Substanz ist 
leicht dialysabel und es besteht daher kein Grund 
zu der Annahme, daß sie sich nicht in wahrer 
Lösung befindet. Auch Trypsin geht durch eine 
Collodiummembran mit beträchtlicher Geschwin- 
digkeit, so daß es sich auch ebenso wie die Hem- 
mungssubstanz wie eine echt lösliche Substanz 
verhält. 
Binfluß der Reihenfolge der Mischung. 
der Reversibilität der Reaktion. 
Beweis 
Wenn man die Reaktion als eine homogene 
 Massengleichgewichtsreaktion auffassen will, ist 
es notwendig, zu zeigen, daß sie schnell und voll- 
ständig reversibel ist. Heterogene 
sind dagegen gewöhnlich nicht ohne weiteres 
reversibel. Tabelle I vergleicht die Resultate, die 
‚man, erhält, wenn man die Hemmungssubstanz 
mit Trypsin in einem kleinen Volumen Wasser 
mischt und dann verdünnt, mit den Resultaten, 





Tabelle I. 
Binfluß der Art der Zufügung der Hemmungssubstanz 
otwen 
a Kell I ae 
Hydrolyse Inaktivierung 
Trypsin allein (Kontrolle). 
1) 25 cem Gelatine + 1 ccm | 
Trypsin . 0,16 0 
2) (25 cem Golan er i cem 
Hemmungssubstanz) _ a vet N 26 
0,225: 
l'cem Trypsin: .2...2.% 3 
3) 26 cem Gelatine + 2 cem 
(Mischung 1 cem Try psin—+ 0,22 28 
1 com Hemmungssubstanz) 0,22 
Kohle. 
1) (10 ccm Gelatine + 1 cem 
Wasser) + 0,2 ccm Tryp- 0,41 | 0 
sin—Kontröllen.. saci iets 
2) (10 ccm Gelatine + 1 ccm 
Kohlesuspension) + 0,2 0,40 © Me) 
ccm, Trypsins Kara - 
3) 10 ccm Gelatine + (1 ecm 
Kohlesuspension + 0,2 3,00 87 
} 
ecm Trypsin) 
eee teen een 
Das ist eine rein 
Reaktionen 
Einheiten freiem Tryp 
‘lich durch de des Volumens geände er 


zielt, wenn man "Aas Ten 
Lösung | mit der Hommungssübstan 

diinnter 
mischt. : 
Die Versuche zeigen, daß bei Anm der 
Eiweißkörpern dargestellten Hemmungs 
das Be ay a As nat 














aus 
Sh hea 





SITS 





















ER Rae Mies (aie aes Wek 
Einheiten der zugefiigten Hemmungssubstanz (cam Memmungssubstanz X 1) 
 — berechnet RE N 
« ©. beobachtet : ae ae 
Fig. 1. Wirkung der Zufügung steigender Meer: von 
Hemmungssubstanz zu Trypsinlösungen verschiedener 
Stärke, Die ausgezogenen Kurven sind berechnet 
Werte und die Punkte stellen die beobachteten Ein- 
heiten von anwesendem, wirksamen Trypsin dar. _ 
So 


IOs Cot OT REN 

~ 

Gefundene Eimheiten wirksamen Irypsins 














BEER TE 9 Te 
ic Trypsin "Einheiten hy Sua 
beobachtet — A 
: — berechnet _ 
Fig.-2. Der Einfluß der Gesamtmenge des Trypeiu 
auf die Inaktivierung, die durch 5 Hemmungsein- 
heiten bewirkt wird. Steigende Mengen Trypsins wer- 
den zu Reihen von Röhrchen hinzugefügt, von denen 
jedes 25 cem Gelatinelösung und 5 Hemmungsein- 
heiten enthält. Gleichzeitig wird unter denselben Ver- 
suchsbedingungen eine Reihe ohne Hemmungssubsta 
angesetzt. 

N 
wird. Die mit Kohle erhaltenen Resultate si 
davon ganz verschieden. Hier ist die Verbindung 
sehr viel vollständiger, wenn die Kohle zu ‘kon- 
zentrierten Trypsinlösungen ‚hinzugefügt wi 
wie Hedin (5) gefunden hat. Die Verbindu 
mit Kohle ist daher nicht leicht reversibel. Di 
obigen Experimente zeigen daher nach mei 

