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agitata, veniva filtrata traverso ovatta sterile in un palloncino pure sterilizzato, e 
ciò per togliere i piccoli grumi di coltura che eventualmente fossero rimasti e ren- 
dere la sospensione dei germi nell'acqua la più uniforme ed omogenea possibile: con 
una pipetta sterilizzata si aggiungevano 3 goccie di tale acqua inquinata in tre pal- 
loni contenenti ciascuno, secondo i casi, 150 cc. di acqua distillata, oppure 150 ce. 
di acqua Marcia o di acqua Felice; tali palloni, con l’acqua in essi contenuta, chiusi 
con tappi di ovatta erano stati precedentemente sterilizzati nell’autoclave a 110° 
per mezz'ora. Quindi mediante una buretta si aggiungeva in uno dei palloni la quan- 
tità di soluzione 1:10000 di fluoruro d'argento necessaria per avere nel liquido del 
pallone la soluzione di Fl Ag del titolo voluto: nel secondo pallone si aggiungevano 
altrettanti cc. di soluzione 1:10000 di nitrato d'argento; nel terzo infine un egual 
numero di ce. di acqua distillata e sterilizzata: il liquido di quest’ultimo pallone 
serviva per controllo: i palloni, chiusi con i rispettivi tappi di ovatta, dopo agitati 
ripetutamente, venivano lasciati alla luce, e dopo 10, 15, 30 minuti, 1, 2 ore dal- 
l'aggiunta del disinfettante, venivano prelevati da ciascun pallone, servendosi per 
ogni campione di pipette sterilizzate e distinte, campioni di 5 cc., esattamente mi- 
surati, del liquido, che venivano posti in grandi scatole del Petri sterilizzate, 
nelle quali si versava subito dell’agar sterile oppure della gelatina: le colture a 
piatto così preparate venivano poste in termostato a 36° (quelle in gelatina a tem- 
peratura conveniente). La prima lettura o conta delle colonie sviluppatesi si faceva 
dopo 2 giorni e la seconda dopo 4; se le piastre risultavano sterili venivano tenute 
per altri 3-5 giorni ancora in termostato. Dell’acqua di corzr0//0, ossia di quella del 
terzo pallone, alla quale non era stato aggiunto alcun disinfettante, si prelevavano 
campioni solamente dopo 10 minuti e dopo 2 ore, sempre però di 5 cc. con i quali 
si facevano nello stesso modo colture a piatto, che erano tenute in termostato come 
le altre. 
Dopo 2 ore dall’aggiunta del disinfettante, si aspiravano 50 cc. del liquido da 
ciascuno dei due palloni nei quali all'acqua era stato aggiunto il disinfettante (FlAg 
o NO? Ag) servendosi per ognuno di essi di una pipetta distinta da 50 cc. e steri- 
lizzata a 160°, e si versavano in due altri palloncini contenenti ciascuno 100 cc. di 
soluzione 1°/, di peptone e cloruro di sodio, precedentemente preparati, chiusi con 
tappo di ovatta e sterilizzati nell'autoclave a 110° per mezz'ora: questi palloncini 
erano poi mantenuti in termostato a 36°. Questa ricerca veniva eseguita per mettere 
in coltura una quantità grande del liquido disinfettato e ciò per assodare ‘in modo certo 
e indiscutibile se esso fosse effettivamente sterile: poichè con tale procedimento, detto 
di accrescimento 0 di arricchimento, usando tutte le cautele dell’asepsi, anche se 
un solo germe fosse sfuggito all'azione del disinfettante, la soluzione di peptone e 
cloruro sodico rappresentava un sostrato di coltura favorevole al suo sviluppo, e così 
riesciva facile dopo qualche giorno dimostrare l'inquinamento del liquido, oltre che 
per il suo intorbidamento, anche con l’esame colturale e microscopico di esso, ossia 
con i passaggi in agar e in brodo risultanti positivi e con preparati colorati o a 
goccia pendente. Se invece dopo 8-10 giorni, sempre mantenuta in termostato, la so- 
luzione di peptone e cloruro sodico, cui erano stati aggiunti 50 cc. dell’acqua disin- 
fettata, rimaneva perfettamente limpida e i passaggi da essa in brodo e in agar si 
