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2° Sviluppo in sostrati contenenti nitrito invece di nitrato. — Avendo nelle 
prime esperienze adoperato nitrito impuro si ebbe sviluppo e formazione di schiuma. 
Però avendo ricercato col metodo qualitativo di Piccini della soluzione solforica d'urea, 
zingo e salda d'amido iodurata se i nitriti contenessero nitrati, si potè constatare la 
loro presenza. 
Con nitriti puri (preparati da noi) non abbiamo avuto sviluppo. 
3° Sviluppo in sostrato contenenti iponitrito. — Abbiamo ottenuto l'iponi- 
trito di sodio cristallizzato col seguente metodo: 
Gr. 100 di nitrito di sodio con gr. 30 di soda furono sciolti in cc. 500 di acqua. 
In questa soluzione, tenuta in» miscuglio frigorifero, furono versati a poco a poco due 
chili di amalgama liquida di sodio al 2°/,. Cessato lo sviluppo gassoso, si decantò 
il liquido dal mercurio metallico e si aggiunse ossido di mercurio sino a che questo 
sì depositava inalterato; cioè sino a decomposizione completa dell’ idrossillammina 
formatasi come prodotto secondario. 
Il liquido filtrato alla pompa venne esattamente saturato con acido acetico e 
precipitato con nitrato d' argento. 
Si ottenne in tal modo un abbondante precipitato giallo d'iponitrito d’argento, 
che venne filtrato e lavato esattamente. 
Questo precipitato ancora umido viene mescolato con cloruro di sodio in eccesso, 
ed in tal modo dopo filtrazione si ottiene una soluzione d'iponitrito di sodio esente 
di cloruro. Questa soluzione trattata con alcool assoluto lascia deporre al fondo della 
bevuta un olio pesante che viene separato dal liquido sovrastante, che diluito con poca 
acqua e messo nel vuoto, lascia depositare delle lamine cristalline d'iponitrito sodico. 
Disgraziatamente questo sale in soluzione acquosa si decompone in poche ore ed 
è inoltre decomposto dal glucosio, e quindi per vedere se veniva almeno in parte 
ridotto in azoto dal B. denitrificans V, si è dovuto ricorrere al seguente artificio. 
Ad un palloncino contenente una cultura in pieno sviluppo su asparagina e fosfato, 
è stato posto un tappo a due fori attraversati, uno da un tubo di vetro portante un 
tubo di gomma con una pinza. e l’altro da un tubetto chiuso all'estremità nel quale 
veniva posto l’iponitrito solido, protetto da uno stratarello di ovatta. Fatto il vuoto 
alla pompa e capovolto il palloncino in un bagno di acqua, la soluzione completa del- 
l’iponitrito solido avvenne, come si era preveduto, lentissimamente in 5-6 giorni. In 
queste condizioni i batterî avevano campo d'esplicare la loro azione riduttrice prima 
che l’ iponitrito avesse potuto decomporsi spontaneamente in ossidulo di azoto ed 
idrato sodico. 
Estratto il gas e agitato in una pipetta Hempel a potassa, non si ebbe dimi- 
nuzione di volume, però venne completamente assorbito dall'acqua bollita. 
Il gas era dunque tutto ossidulo di azoto e nessuna riduzione dell’ iponitrito era 
avvenuta per opera di batterî. 
4° Ricerca dell’ iponitrito nelle soluzioni in fermentazione. — Il tentativo 
di ricercare col nitrato d’argento l’ iponitrito in soluzioni esenti di cloruro e fosfato 
fu negativo. 
5° Sviluppo in ambiente di N30. — In un palloncino con una soluzione di 
glucosio-cloruro e fosfato innestato col B. denitrificans V, fu fatto gorgogliare ossidulo 
